УДК
577.332.23:539.199

КОНСТРУИРОВАНИЕ НАДМОЛЕКУЛЯРНОЙ ИНДИКАТОРНОЙ СИСТЕМЫ «ЦЕЛЛЮЛОЗА - НАНОАЛМАЗ - УРЕАЗА»

Опубликовано в Вестник КрасГАУ · Страницы 277–282 · Рубрика: БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
Получено: 21.12.2018 Одобрено: 23.12.2018 Опубликовано: 25.12.2018 Язык публикаций: RUS
Последовательной иммобилизацией компонентов сконструирована надмолекулярная индикаторная сис- тема биохимического определения мочевины: целлюло- за - наноалмаз - уреаза. Модифицированные наноалма- зы (МНА) ковалентно иммобилизованы на полимерный носитель (гранулы ДЭАЭ-целлюлозы) с помощью реак- ции нуклеофильного присоединения. Установлено, что данная реакция, проводимая при весовом соотношении компонентов 4:1 (ДЭАЭ-целлюлоза : МНА), позволяет иммобилизовать до 110 мкг наночастиц на 1 мг полиме- ра. Биомаркер (фермент уреаза) был иммобилизован с помощью ковалентной пришивки на полученный компо- зит «полимер - МНА», поверхность которого была предварительно активирована бензохиноном. В срав- нительных экспериментах фермент иммобилизовали на исходные гранулы полимера с помощью неспецифиче- ской адсорбции и ковалентной пришивки. Активность фермента в полученных надмолекулярных комплексах определяли уреазным салицилат-гипохлоритным ме- тодом по образованию окрашенного продукта, который оценивали спектрофотометрически. Показано, что молекулы уреазы могут быть иммобилизованы на гра- нулы ДЭАЭ-целлюлозы посредством адсорбции и кова- лентной пришивки, проявляя после этого функциональ- ную активность в обоих случаях. Однако было показано, что при многоразовом использовании этих индикатор- ных систем для тестирования аналита наблюдается заметная инактивация фермента, что сопровождается снижением выхода окрашенного продукта. В то же вре- мя в сравнительных экспериментах было установлено, что фермент, ковалентно иммобилизованный на компо- зит «ДЭАЭ-целлюлоза - МНА», обладает большей функциональной эффективностью и обеспечивает бо- лее стабильный выход цветного продукта при много- кратном тестировании мочевины. Сравнительные ис- следования показали, что фермент, ковалентно при-шитый на композит «ДЭАЭ-целлюлоза - МНА», облада- ет также большей термостабильностью и значитель- но медленнее теряет активность при многоразовом использовании индикаторной системы для тестирова- ния мочевины при температуре 37 °C по сравнению с ферментом, ковалентно иммобилизованным на поли- мер. Результаты проведенных исследований открыва- ют перспективы конструирования нового класса мно- горазовых систем индикации (надмолекулярных ком- плексов «полимерный носитель - наноалмаз - биомар- кер») для биомедицинской аналитики.
наноалмаз, целлюлоза, уреаза, иммобилизация, надмолекулярный комплекс, индикатор- ная система
Войти или Создать
* Забыли пароль?