Россия
Россия
Россия
Цель исследования – изучение уровня ферментативной активности общей и плацентарной щелочной фосфатаз в сухостойный период и возможности применения данных показателей как прогностических маркеров послеродовых осложнений у коров. Задачи исследования: изучить динамику изменения в крови сухостойных коров, уровень ферментативной активности общей щелочной и плацентарной щелочной фосфатаз (ПЩФ); определить прогностическую информативность плацентарной щелочной фосфатазы при прогнозе послеродовых болезней у коров. Опыт проводился в ФГБНУ ФАНЦА ПЗ «Комсомольское» Павловского района Алтайского края. Были сформированы из коров две группы: контрольная группа в количестве 61 гол. с физиологическим течением родов и послеродового периода и опытная группа животных 43 гол. с послеродовыми осложнениями, к которым отнесли эндометрит после самопроизвольного отделения последа; задержание последа; послеродовой парез. Для лабораторных исследований брали кровь у коров из подхвостовой вены в утренние часы перед кормлением, однократно за 45–15 дней до отела. Достоверные изменения ферментативной активности ПЩФ в сравнении с животными контрольной группы, как за 45, так и за 15 дней до отела, отмечены лишь у животных с задержанием плодных оболочек на 45 и 16,7 Ед/л соответственно (p < 0,05). Достоверное снижение в крови стельных коров за 15 дней до отела уровня ферментативной активности ПЩФ ниже 14,0 Ед/л может служить прогностическим признаком развития послеродовых осложнений, в частности задержания плодных оболочек.
прогностический маркер, послеродовые заболевания, щелочная фосфатаза, плацентарная щелочная фосфатаза, ферментативная активность.
Введение. Щелочные фосфатазы относятся к группе ферментов, обладающих строгой тканевой специфичностью, что позволяет с достаточной степенью вероятности определить происхождение энзима в крови, моче и других тканевых жидкостях. Фосфатазы, проявляющие свою каталитическую активность при щелочных значениях рН, отличаются не только по изоферментному составу, но и по целому ряду химических, физических и каталитических характеристик, определяемых особенностями физиологии данного органа или ткани. Широкий эволюционный полиморфизм данных энзимов дополняется функциональной онтогенетической гетерогенностью, выявляемой в процессе развития организма или формирования адаптивных или патологических реакций [1].
Активность плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) в крови матери при нормальной и осложненной беременности отражает состояние фето-плацентарного комплекса и, в частности, функцию ворсинчатого хориона плаценты [2].
Как активность общей сывороточной щелочной фосфатазы, так и вклад в общую активность каждого конкретного изофермента зависят от возраста биологического объекта, а также от особенностей его физиологического (например, беременность) или патологического состояния [3]. То есть увеличение в сыворотке крови пациента активности одного из изоферментов щелочной фосфатазы может адресно указывать на место протекания патологического процесса [4, 5]. Причем следует отметить, что увеличение активности одного из изоферментов щелочной фосфатазы не всегда приводит к увеличению общей активности фермента, которая может оставаться в пределах референтных величин за счет уменьшения активности других изоформ щелочной фосфатазы, имманентно присутствующих в сыворотке крови [6].
Цель исследований: изучение изменения ферментативной активности общей и плацентарной щелочных фосфатаз в сухостойный период и определение их информативной ценности для прогноза послеродовых заболеваний.
Задачи исследований: изучить динамику изменения в крови сухостойных коров, уровень ферментативной активности общей щелочной и плацентарной щелочной фосфатаз; определить прогностическую информативность плацентарной щелочной фосфатазы при прогнозе послеродовых болезней у коров.
Материалы и методы исследований. Экспериментальные исследования проводились в ФГБНУ ПЗ «Комсомольское» Павловского района и в лаборатории ветеринарии ФГБНУ ФАНЦА. С целью определения течения родов и родовых осложнений использовали статистические данные журнала для регистрации больных животных (форма № 1-вет.). Характер инволюции матки и послеродовые осложнения определяли на 10-й и 21–30-й дни после отела при помощи портативного УЗИ сканера iScan со встроенным электронным линейным ректальным датчиком 7,5 МНz.
Контрольная группа (61 гол.) была сформирована из коров с физиологическим течением родов и послеродового периода. Опытная группа животных составила 43 коровы с послеродовыми осложнениями, к которым отнесли: эндометрит после самопроизвольного отделения последа, задержание последа, послеродовой парез.
Для лабораторных исследований брали кровь у коров из подхвостовой вены в утренние часы перед кормлением, однократно за 45–15 дней до отела.
Исследование в крови плацентарной щелочной фосфатазы проводили кинетическим УФ-методом, предварительно в сыворотке крови термически инактивировали другие изоферменты, при температуре 65 ºС в течение 10 мин [7]. Ферментативную активность общей щелочной фосфатазы определяли кинетическим УФ-методом с использованием наборов реагентов ЗАО «Вектор-Бест», согласно инструкции по применению данных наборов при помощи фотометрического автоматического анализатора ChemWellCombi 2910 (ChemWell 2910- AwareneessTehnology, США).
Статистическую обработку результатов выполняли с помощью программы Excel и оценки критериев достоверности по Стьюденту.
Результаты исследований и их обсуждение. Всего была изучена кровь на уровень ферментативной активности общей ЩФ и ПЩФ в разные периоды до отела от 104 коров, среди которых у 35 животных после отела развились различные послеродовые заболевания. В зависимости от срока стельности животные были условно разделены на 2 подгруппы (табл.°1).
Таблица 1
Динамика изменения уровня ферментативной активности ЩФ и ПЩФ
в крови сухостойных коров
|
Показатель |
Кол-во дней до отела |
Характер течения послеродового периода |
|||
|
Контрольная группа |
Опытная группа |
||||
|
Задержание последа |
Эндометрит |
После-родовой парез |
|||
|
ЩФ общая, Ед/л |
45 |
145,4±17,07 |
172,2±8,9↑ |
148,3±18,88 |
98,8±14,98* |
|
15 |
142,7±14,78 |
117,0±15,33* |
114,9±13,5 |
124,6±8,2 |
|
|
ЩФ плацентарная, Ед/л |
45 |
50,1±7,46 |
96,6±1,1* |
45,2±8,57 |
53,5±15,59 |
|
15 |
31,5±4,76 |
14,8±3,84* |
34,3±3,87 |
28,0±7,40 |
|
*р < 0,05.
При анализе данных таблицы 1 отмечается, что достоверное снижение ферментативной активности общей ЩФ на 46,6 Ед/л в среднем за 45 дней до отела в сравнении с контрольной группой животных произошло только у тех коров, у которых впоследствии развился послеродовой парез, однако данные изменения происходили в пределах стандартных интервалов (p < 0,05). В группе животных с задержанием последа уровень ферментативной активности общей ЩФ в среднем превышал верхний уровень стандартных интервалов на 19 Ед\л, хотя изменения не достоверны в сравнении с контрольной группой животных. С увеличением сроков стельности, за исключением животных с послеродовым парезом, в крови коров, как с физиологическим течением послеродового периода, так и с послеродовыми осложнениями, происходит снижение уровня общей ЩФ, однако в группах коров с осложнениями изменения уровня ферментативной активности были более резкими, что согласуется с данными Ю.А. Долженкова (2010). В поздний предродовой период в среднем за 15 дней до отела у животных, у которых после отела произошло задержание плодных оболочек, уровень ферментативной активности общей ЩФ достоверно отличался от животных контрольной группы на 25,7 Ед/л, однако данные изменения происходили в пределах стандартных интервалов (p < 0,05). Животные с послеродовым парезом имели обратную динамику изменения ферментативной активности общей ЩФ в поздний сухостойный период, т. е. происходило незначительное увеличение ферментативной активности общей ЩФ в пределах стандартных интервалов, вероятнее всего связанное с нарушениями минерального обмена, которые впоследствии привели к развитию у животных гипокальцемии.
Динамика изменения ферментативной активности ПЩФ во всех группах животных имела однонаправленный характер, т. е. с увеличением сроков стельности происходило снижение ее активности в среднем на 34,2 Ед/л. Следует отметить, что в зависимости от характера послеродовых осложнений наиболее резкое снижение ферментативной активности ПЩФ было характерно для животных с задержанием последа, у которых уровень снижения активности составил 81,8 Ед/л. Однако в целом средние значения достоверно между группами коров не отличались. Достоверные изменения ферментативной активности ПЩФ в сравнении с животными контрольной группы, как за 45, так и за 15 дней до отела, отмечены лишь у животных с задержанием плодных оболочек на 45 и 16,7 Ед/л соответственно (p < 0,05)(табл. 1).
С целью подтверждения прогностической информативности уровня ферментативной активности ПЩФ как маркера послеродовых заболеваний был определен минимальный уровень активности ПЩФ в среднем за 15 дней до родов, при котором в 100 % случаях наблюдали осложнения в послеродовой период, который составил 14 Ед/л.
При определении прогностической информативности ПЩФ как маркера послеродовых заболеваний установлено, что в контрольной группе животных в среднем за 15 дней до отела уровень ферментативной активности ПЩФ выше 14 Ед/л наблюдался у 78,2 % животных, при эндометрите уровень активности ПЩФ выше 14 Ед/л отмечается у 88,2 % животных, при послеродовом парезе уровень ферментативной активности ПЩФ выше 14 Ед/л у отмечен у 87,5 % животных. При задержании последа уровень ферментативной активности ПЩФ выше 14 Ед/л наблюдается только у 20,0 % животных, т. е. у 80,0 % коров, имеющих показатель ПЩФ ниже 14 Ед/л, после отела происходило задержание плодных оболочек (табл. 2).
Таблица 2
Прогностическая информативность уровня ферментативной активности
ПЩФ при послеродовых болезнях у коров
|
Показатель |
n |
Уровень ферментативной активности ПЩФ > 14,0 Ед/л, голов (%) |
|
Количество коров, всего |
104 |
|
|
В т. ч.: с физиологическим течением послеродового периода |
69 |
54 (78,2) |
|
задержанием плодных оболочек |
10 |
2 (20,0) |
|
эндометритом |
17 |
15 (88,2) |
|
послеродовым парезом |
8 |
7 (87,5) |
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют, что с увеличением сроков стельности, за исключением животных с послеродовым парезом, в крови коров как с физиологическим течением послеродового периода, так и с послеродовыми осложнениями происходит снижение уровня общей ЩФ, а снижение ферментативной активности ПЩФ происходит независимо от того, какие осложнения развивались после отела. Достоверное снижение в крови стельных коров за 15 дней до отела уровня ферментативной активности ПЩФ ниже 14,0 Ед/л может служить прогностическим признаком развития послеродовых осложнений, в частности задержания плодных оболочек. Наиболее оптимальное время для исследования вышеназванных показателей в крови сухостойных является 15–20 дней до родов. Прогностическая точность использования данного показателя составляет 80,0 %.
1. Plouzec С.A., Leslie K.K., Stephens J.K., Ccou J.Y. Differential gene expression in amnion, chorion and trophoblast of the human placenta // Placenta, 1993. V. 14 № 3. Р. 277–285.
2. Цимбалова Т.А., Цирельников Н.И. Сравнительная электрофоретическая характеристика изоформ щелочной фосфатазы в плазме крови и экстрактах ворсинчатого хориона на различных сроках беременности // Бюл. клин. эксп. мед. 1992. Т. 114. С. 236–238.
3. Уиллард М.Д. Нарушение функции желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы и печени // Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных. М.: Аквариум, 2004. C. 194–235.
4. Raymond L.J. Heather Tarpley L., Kenneth Latimer S., Perry Bain J. // Alkaline Phosphatase Activity asa Clinical Chemistry Diagnostic Aid Class. Athens, GA. Р. 30602–7388.
5. Бокарев А.В., Стекольников А.А. Активность щелочной фосфатазы и концентрация сиаловых (нейраминовых) кислот в сыворотке крови у собак с некоторыми патологиями костной системы // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. науч. тр. № 134. СПб.: Изд-во СПбГАВМ, 2002. С. 31–33.
6. Стекольников А.А. Прогностическое значение печеночного изофермента ALP при лечении собак циклофосфаном // Структурно-функциональные особенности биосистем севера (особи, популяции, сообщества): мат-лы конф., (26–30 сентября 2005 г., Петрозаводск). Ч. 2 (М-Я). Петрозаводск, 2005.
7. Бокарев А.В., Стекольникова А.А. Исследование ингибирования изоферментов щелочной фосфатазы сыворотки крови собак при различных режимах тепловой денатурации // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2010. № 1 (5). С. 8–18.
