Введение. На сегодняшний день в целях сохранения хозяйственно ценных признаков сортов и гибридов ягодных растений, в частности малораспространенных и трудноразмножаемых культур, одним из наиболее совершенных и экономически целесообразных способов получения генетически однородного и оздоровленного селекционного посадочного материала ягодных культур является метод микроклонального размножения [1–4]. Клональное микроразмножение в настоящее время является единственным методом быстрого размножения элитных селекционных клонов и новых сортов культурных растений [5, 6]. Кроме того, методы культивирования in vitro ягодных растений рода Vaccinium также используются в криоконсервации, селекции in vitro, мутагенезе, межвидовых и интерсекционных гибридах, генетической трансформации и производстве вторичных метаболитов фармацевтической ценности в суспензионных и каллусных культурах [7–10].
В настоящее время в условиях Московского региона ведется работа по разработке технологического регламента выращивания микроклонально размноженного посадочного материала наиболее перспективных ягодных культур рода Vaccinium, в т. ч. клюквы болотной [11]. Клюква – высокоценная пищевая коммерческая ягодная культура. Плоды клюквы являются источником полезных для здоровья питательных веществ, среди которых: пищевые волокна, антиоксиданты (витамин С, бета-каротин, фолиевая кислота, эллаговая кислота, антоцианы). Было установлено, что из группы флавонолов в образцах плодов клюквы преобладают гиперозид и мирицетин-3-O-галактозид; из группы антоцианов – цианидин-3-O-галактозид, цианидин-3-O-арабинозид, пеонидин-3-O-галактозид и пеонидин-3-O-арабинозид, а из группы тритерпеновых соединений – урсоловая кислота [12]. Ягоды клюквы проявляют выраженные антибактериальные и противогрибковые свойства благодаря наличию в них антоцианозидов, бензойной кислоты и других важных биологически активных соединений. Ягоды употребляются как в свежем, так и в переработанном виде – в замороженном, консервированном, а также в виде концентратов и сушеных продуктов, таких как варенье, конфеты, желе, соки, сиропы, мороженое, выпечка, мюсли, молоко и алкогольные напитки. Продукты из плодов растения находят применение в качестве пищевых добавок и для изготовления различных фармацевтических препаратов. Следует особо подчеркнуть, что этанольный экстракт плодов клюквы является перспективным природным средством для разработки на его основе медицинских препаратов для лечения бактериальных инфекций и рака [13].
Необходимо отметить, что главным ограничивающим фактором развития микроклонально размноженных растений-регенерантов при промышленном выращивании являются трудности их адаптации ex vitro, так как пересадка растений в нестерильные почвенные условия сопровождается колоссальным физиологическим стрессом, связанным с новым режимом влажности, освещенности и питания, а также высокой патогенной нагрузкой [14–17]. Сложность перевода пробирочных растений в условия культивирования ex vitro связана с некоторыми анатомическими и физиологическими особенностями ягодных растений in vitro [18, 19]. Поэтому основная задача при адаптации микроклонально размноженных растений заключается в смягчении абиотического стресса и обеспечении плавного перехода к культивированию в новых условиях среды. Важной составляющей в процессе адаптации микроклонов является также оптимизация состава субстрата [20]. Следует особо подчеркнуть, что в нестерильных условиях микроклонально размноженные растения часто сталкиваются с проблемой водного баланса [21, 22]. Дело в том, что, попадая в нестерильные условия, микроклоны становятся чрезвычайно уязвимыми к дисбалансу поступления воды в растения на фоне увеличения транспирации.
В связи с этим в процессе адаптации микроклонов к новым условиям роста необходимо контролировать все процессы развития растений, что приведет к высокой приживаемости посадочного материала и напрямую повлияет на существенное снижение его себестоимости, показав в итоге высокий экономический эффект. Поскольку адаптация растений, размноженных in vitro к нестерильным условиям является обязательным этапом клонального микроразмножения, исследования, направленные на выявление адаптивного потенциала микроклонально размноженных растений V. oxycoccos, а также разработка и усовершенствование технологии их адаптации являются актуальными задачами ягодоводства России.
Цель исследования – провести усовершенствование технологии адаптации и доращивания микроклонов клюквы болотной (Vaccinium oxycoccos L.) к условиям ex vitro в условиях интродукции в Московском регионе.
Задачи: определить приживаемость и морфобиометрические показатели сортовых растений V. oxycoccos (Краса Севера, Фомич), полученных методом клонального микроразмножения, при адаптации к нестерильным условиям ex vitro в зависимости от состава субстрата; приживаемость и морфобиометрические показатели микроклонально размноженных сортовых растений V. oxycoccos (сорта Краса Севера, Фомич) при доращивании в контейнерах на субстрате из верхового торфа.
Объекты и методы. Исследования проводились на базе Российского государственного аграрного универститета – МСХА им. К.А. Тимирязева в 2024–2025 гг. В качестве источников объектов исследования изучали растения клюквы болотной (V. oxycoccos) сортов российской селекции – Краса Севера и Фомич, полученные методом клонального микроразмножения по общепринятым методикам [1]. Регенерацию растений проводили на модифицированной культуральной среде Woody Plant Medium (WPM) c добавлением зеатина на этапе пролиферации побегов («собственно микроразмножение»), индолилуксусной кислоты (ИУК) – на этапе укоренения микропобегов in vitro.
Укоренившиеся in vitro растения-регенеранты извлекали из пробирок, корни растений промывали в 1 %-ном растворе KMnO4 в течение 30 с, затем пересаживали в мини-парники для адаптации. В качестве субстратов для адаптации использовали торф верхового типа (pHKCl = 2,8–3,1; размер фракции – 20–40 мм), а также смеси торфа с речным песком (размер фракции – 0,4–0,8 мм) в соотношении 3 : 1, смеси торфа с вермикулитом в соотношении 3 : 1 (размер фракции – 0,5–2,0 мм), смеси торфа с агроперлитом (размер фракции – 1,0–5,0 мм) в соотношении 3 : 1, смеси торфа с природным вулканическим цеолитом (размер фракции – 3,0–5,0 мм) в соотношении 3 : 1. Предварительно торф пропаривали при температуре не ниже 90 °C в течение 40 мин под укрытием при влажности 80–90 %; речной песок промывали и обжигали при температуре 180 °C в течение 2 ч. В адаптационном помещении поддерживались следующие условия: интенсивность освещения – 8000 лк с использованием светодиодных ламп OSRAM Fluora L36/77 T8 (OSRAM Licht AG, Германия) с цветовой температурой 4000 К, PPFD 165 мкмоль/м2/с, соотношение красного (650–660 нм) и синего (440–450 нм) света 3 : 1, температура воздуха 25 °C, относительная влажность воздуха – 80–90 %. Ежедневно в течение 14 сут проводили опрыскивание растений водой (не менее 3 раз в сутки). Учет приживаемости и морфометрических показателей растений (число побегов на растении, шт.; средняя длина побега, см; число листьев на побеге, шт.) проводили на 10-е, 20-е и 30-е сутки адаптации растений к нестерильным условиям ex vitro. Для каждого варианта обработки (субстрата) тестировали 10 растений в 3 повторностях.
В I декаде июня 2025 г. растения пересаживали в контейнеры объемом 1 и 2 л, наполненные субстратом из верхового торфа, и доращивали в условиях закрытого грунта. В течение трех месяцев в конце каждой декады проводили учет приживаемости и морфобиометрических показателей растений (средняя длина побега, см; число побегов, шт/растение; количество листьев, шт/побег).
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием программных средств MS Excel.
Результаты и их обсуждение. При оценке морфобиометрических показателей микрорастений V. oxycoccos, полученных методом клонального микроразмножения, установлено, что на 10-е сут адаптации к нестерильным условиям средняя длина побега растений сорта Краса Севера варьировала от 2,3 см на субстратах из смеси верхового торфа с речным песком (3 : 1) и смеси торфа с вермикулитом (3 : 1) до 2,6 см на смеси торфа с вулканическим цеолитом, тогда как на 20-е сут – от 3,4 см в варианте с использованием субстрата из смеси торфа с песком (3 : 1) до 4,4 см – торфа с агроперлитом (3 : 1). Промежуточные значения приростов отмечены на верховом торфе, смеси торфа с вермикулитом 3 : 1 и смеси торфа с цеолитом 3 : 1 (табл. 1).
Таблица 1
Приживаемость и морфобиометрические показателей растений Vaccinium oxycoccos, полученных методом клонального микроразмножения, на этапе адаптации
к нестерильным условиям
Survival and morphobiometric parameters of Vaccinium oxycoccos plants obtained
by clonal micropropagation at the stage of adaptation to non-sterile soil conditions
|
Состав субстрата |
Средняя длина побега, см |
Число побегов на растении, шт. |
Количество листьев на побеге, шт. |
Приживаемость, % |
||||||
|
Краса Севера |
Фомич |
Краса Севера |
Фомич |
Краса Севера |
Фомич |
Краса Севера |
Фомич |
|||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
||
|
10-е сут |
||||||||||
|
Верховой торф |
2,5±0,36 |
2,7±0,32 |
1,0±0,15 |
1,0±0,14 |
6,9±0,15 |
5,9±0,29 |
42 |
56 |
||
Окончание табл. 1
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
|
Верховой торф + речной песок 3:1 |
2,3±0,17 |
2,4±0,48 |
1,0±0,12 |
1,0±0,21 |
6.2±0,46 |
4.2±0,44 |
62 |
44 |
|
Верховой торф + агроперлит 3:1 |
2,3±0,23 |
2,5±0,46 |
1,0±0,17 |
1,0±0,19 |
7,1±0,23 |
6,8±0,25 |
67 |
69 |
|
Верховой торф + вермикулит 3:1 |
2,4±0,51 |
2,4±0,29 |
1,0±0,11 |
1,0±0,17 |
6,3±0,34 |
5,4±0,38 |
56 |
51 |
|
Верховой торф + вулканический цеолит 3:1 |
2,6±0,27 |
2,8±0,36 |
1,0±0,19 |
1,0±0,23 |
7,2±0,21 |
6,4±0,17 |
62 |
87 |
|
20-е сут |
||||||||
|
Верховой торф |
3,6±0,10 |
3,7±0,17 |
2,0±0,17 |
2,0±0,19 |
13,2±0,51 |
14,1±0,22 |
39 |
49 |
|
Верховой торф + речной песок 3:1 |
3,4±0,19 |
3,6±0,32 |
2,0±0,23 |
2,0±0,28 |
12,7±0,14 |
13,3±0,45 |
54 |
40 |
|
Верховой торф + агроперлит 3:1 |
3,9±0,27 |
3,7±0,45 |
2,0±0,35 |
2,0±0,11 |
10,2±0,33 |
11,2±0,34 |
59 |
61 |
|
Верховой торф + вермикулит 3:1 |
3,7±0,44 |
3,6±0,23 |
2,0±0,31 |
2,0±0,10 |
11,2±0,21 |
11,2±0,27 |
54 |
49 |
|
Верховой торф + вулканический цеолит 3:1 |
3,8±0,37 |
3,9±0,31 |
2,0±0,47 |
2,0±0,29 |
13,7±0,41 |
14,2±0,29 |
68 |
72 |
|
30-е сут |
||||||||
|
Верховой торф |
4,5±0,71 |
4,9±0,61 |
3,0±0,11 |
4,0±0,53 |
17,9±0,33 |
20,5±0,45 |
34 |
38 |
|
Верховой торф + речной песок 3:1 |
4,1±0,14 |
5,1±0,56 |
3,0±0,14 |
3,0±0,41 |
16,8±0,56 |
19,5±0,41 |
48 |
37 |
|
Верховой торф + агроперлит 3:1 |
4,8±0,32 |
5,8±0,44 |
3,0±0,10 |
3,0±0,17 |
17,9±0,48 |
18,5±0,38 |
51 |
57 |
|
Верховой торф + вермикулит 3:1 |
4,2±0,51 |
4,8±0,32 |
3,0±0,21 |
3,0±0,37 |
16,4±0,31 |
20,5±0,19 |
48 |
44 |
|
Верховой торф + вулканический цеолит 3:1 |
4,7±0,57 |
5,8±0,30 |
3,0±0,17 |
4,0±0,34 |
19,9±0,27 |
21,2±0,32 |
63 |
65 |
В целом за 20 дней прирост побегов V. oxycoccos сорта Краса Севера варьировал от 0,9 см на верховом торфе до 1,6 см на смеси торфа с агроперлитом. На 30-е сут адаптации отмечено, что на субстрате из смеси торфа с цеолитом (3 : 1) длина побегов увеличилась на 2,1 см (или 45 %), тогда как наименьшее изменение данного показателя (1,5 см, или 31 %) выявлено на субстрате смеси из торфа с агроперлитом (3 : 1).
При исследовании влияния состава субстрата на длину побегов растений V. oxycoccos сорта Фомич выявлена аналогичная закономерность: первые 20 сут адаптации практически на всех видах субстратов она изменилась от 1,0 до 1,2 см, что составляет около 28 %. При этом на начальном этапе адаптации к нестерильным условиям состав субстрата не оказывал существенного влияния на длину побегов у сорта Фомич. На 30-е сут адаптации максимальный прирост длины побегов отмечен на субстрате из смеси торфа и агроперлита 3 : 1 (3,3 см, или 57 %), минимальный – на верховом торфе (2,2 см, или 45 %). Таким образом, наиболее динамичное увеличение длины побегов у растений сорта Краса Севера отмечено на субстрате, состоящем из торфа и цеолита в соотношении 3 : 1, у сорта Фомич – на субстрате из торфа и агроперлита в соотношении 3 : 1.
Отмечено равномерное увеличение числа побегов на растениях V. oxycoccos сорта клюквы Краса Севера с 1 до 3 шт. (в 3 раза) на всех субстратах. Поэтому на начальных этапах адаптации состав субстрата не оказывал существенного влияния на побегообразовательную способность адаптируемых растений. У сорта Фомич число побегов изменилось с 1 до 4 шт. (в 4 раза), при этом лучшие результаты получены на субстратах, состоящих из торфа и торфа с цеолитом в соотношении 3 : 1, тогда как на остальных субстратах наблюдалось увеличение количества побегов с 1 до 3 шт. (в 3 раза).
Установлено, что на 30-е сут адаптации количество листьев на побеге у растений V. oxycoccos сорта Краса Севера варьировало в широких пределах – от 6,3 шт. на субстрате из смеси торфа с вермикулитом 3 : 1 до 19,9 шт. на смеси торфа с вулканическим цеолитом 3 : 1. Так, при формировании и росте вновь образующихся побегов развивалось и росло количество листьев. Наиболее высокий результат получен при использовании субстрата из смеси торфа с речным песком 3 : 1 и смеси торфа с цеолитом (63 %), тогда на остальных субстратах увеличение количества листьев было несущественно ниже (60–61 %). Количество листьев на одном побеге растений V. oxycoccos сорта Фомич на 30-е сут адаптации варьировало от 4,2 шт. в варианте с использованием субстрата из смеси торфа с песком (3 : 1) до 6,8 шт. – торфа с агроперлитом (3 : 1). При этом наибольшее количество листьев на побегах (15,1–15,3 шт.) сформировалось при адаптации на субстратах из смеси торфа с вермикулитом (3 : 1) и смеси торфа с песком (3 : 1), тогда как наименьшее – при использовании смеси торфа с агроперлитом (3 : 1).
На 30-е сут адаптации отмечено, что лучше всего растения V. oxycoccos адаптировались на субстрате из смеси торфа с вулканическим цеолитом 3 : 1, где приживаемость составила 63–65 %. Несколько меньшей оказалась приживаемость растений при адаптации на субстрате, состоящем из смеси торфа с агроперлитом 3 : 1 (51– 57 %). Самый низкий показатель приживаемость регенерантов выявлен на субстрате из верхового торфа, составив 34 % для сорта Краса Севера и 38 % для сорта Фомич.
Адаптированные растения V. oxycoccos сортов Краса Севера и Фомич были пересажены в контейнеры объемом 1 и 2 л в субстрат из верхового торфа в I декаде июня. Начальная средняя длина побегов растений сорта Краса Севера в контейнерах составляла 4,9–5,1 см при среднем числе побегов 3–4 шт. и количестве листьев 18–19 шт. Средняя длина побегов растений более сильнорослого сорта Фомич после пересадки составила 5,8–6,3 см при количестве листьев на одном растении 18–21 шт. (табл. 2).
Таблица 2
Приживаемость и морфобиометрические показатели растений Vaccinium oxycoccos, полученных методом клонального микроразмножения, при доращивании в контейнерах на субстрате из верхового торфа
Survival and morphobiometric parameters of Vaccinium oxycoccos plants obtained by clonal micropropagation when grown in containers on a high-moor peat substrate
|
Период |
Показатель |
Краса Севера |
Фомич |
|||||
|
Контейнер 1 л |
Контейнер 2 л |
Контейнер 1 л |
Контейнер 2 л |
|||||
|
Месяц |
Декада |
|||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
||
|
Июнь |
I |
Средняя длина побега, см |
4,9±0,39 |
5,1±0,34 |
5,8±0,49 |
6,3±0,41 |
||
|
Число побегов, шт/растение |
3,0±0,16 |
4,0±0,25 |
4,0±0,19 |
5,0±0,09 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
18,5±0,35 |
19,4±0,33 |
20,7±0,34 |
21,6±0,30 |
||||
|
II |
Средняя длина побега, см |
5,4±0,18 |
6,2±0,28 |
6,6±0,19 |
7,1±0,32 |
|||
|
Число побегов, шт/растение |
3,0±0,18 |
4,0±0,11 |
4,0±0,30 |
5,0±0,29 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
22,2±1,18 |
23,8±0,98 |
26,7±0,30 |
27,3±0,18 |
||||
|
III |
Средняя длина побега, см |
6,9±0,33 |
7,3±0,18 |
8,1±0,25 |
8,9±0,20 |
|||
|
Число побегов, шт/растение |
3,0±0,13 |
4,0±0,29 |
4,0±0,21 |
5,0±0,27 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
25,4±1,17 |
26,9±0,75 |
30,5±0,29 |
31,8±0,36 |
||||
|
Июль |
I |
Средняя длина побега, см |
8,3±0,81 |
8,8±0,63 |
10,4±0,55 |
11,6±0,84 |
||
|
Число побегов, шт/растение |
4,0±0,07 |
4,0±0,78 |
4,0±0,67 |
5,0±0,54 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
27,3±1,11 |
28,8±0,95 |
33,5±0,45 |
34,8±0,71 |
||||
|
II |
Средняя длина побега, см |
9,8±0,92 |
10,1±0,47 |
11,9±0,51 |
12,6±0,92 |
|||
|
Число побегов, шт/растение |
4,0±0,12 |
4,0±0,24 |
5,0±0,18 |
5,0±0,27 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
30,9±0,89 |
31,5±0,73 |
36,0±0,76 |
37,9±0,85 |
||||
|
III |
Средняя длина побега, см |
11,3±0,44 |
11,0±0,73 |
12,8±0,49 |
13,3±0,39 |
|||
|
Число побегов, шт/растение |
5,0±0,67 |
5,0±0,62 |
6,0±0,39 |
6,0±0,21 |
||||
|
Количество листьев, шт/растение |
38,4±1,01 |
39,6±1,04 |
40,2±1,02 |
41,8±0,91 |
||||
|
|
||||||||
Окончание табл. 2
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
Август |
I |
Средняя длина побега, см |
12,2±0,51 |
12,5±0,61 |
13,7±0,51 |
13,9±0,77 |
|
Число побегов, шт/растение |
5,0±0,38 |
5,0±0,84 |
6,0±0,67 |
6,0±0,48 |
||
|
Количество листьев, шт/растение |
40,2±1,11 |
40,6±0,99 |
41,3±0,96 |
42,4±1,11 |
||
|
II |
Средняя длина побега, см |
12,2±0,64 |
12,5±0,94 |
13,7±0,78 |
13,9±0,87 |
|
|
Число побегов, шт/растение |
5,0±0,18 |
5,0±0,35 |
6,0±0,45 |
6,0±0,29 |
||
|
Количество листьев, шт/растение |
40,3±1,01 |
40,8±0,79 |
41,6±0,96 |
42,8±1,03 |
||
|
III |
Средняя длина побега, см |
12,2±0,31 |
12,5±0,28 |
13,7±0,49 |
13,9±0,91 |
|
|
Число побегов, шт/растение |
5,0±0,23 |
5,0±0,37 |
6,0±0,46 |
6,0±0,67 |
||
|
Количество листьев, шт/растение |
40,3±0,24 |
40,8±0,72 |
41,6±0,44 |
42,8±1,0 |
||
|
Приживаемость,% |
97 |
98 |
98 |
99 |
В течение первых 10 дней после пересадки растения V. oxycoccos приживались, поэтому за первую декаду наблюдений прирост побегов у сорта Краса Севера составил 0,5 и 1,1 см в горшках объемом 1 и 2 л соответственно, тогда как растения сорта Фомич имели прирост надземной части порядка 0,8 см, начав развиваться более равномерно.
Через месяц наблюдений за растениями V. oxycoccos сорта Краса Севера отмечено, что длина самого высокого побега увеличилась на 2 см, при этом в течение июля наблюдался активный рост, который продолжался до I декады августа, и прирост составил еще около 3 см независимо от объема горшка. В начале II декады августа рост растений закончился и началось одревеснение побегов. На этот момент длина побегов у экземпляров сорта Краса Севера достигла около 12 см, при суммарном числе побегов 5 шт. и количестве листьев на побеге около 40 шт. В горшках объемом 2 л приживаемость растений составила 98 %, что всего на 1 % выше, чем при объеме 1 л.
У растений V. oxycoccos сорта Фомич во II декаде июня начался активный рост побегов вплоть до II декады августа, где средняя длина побегов достигла 13 см независимо от объема горшка. В процентном соотношении прирост составил 57 и 54 % соответственно при объеме горшка 1 и 2 л. При этом за время наблюдений сформировалось по 3 молодых побега во всех вариантах. Общее количество листьев увеличилось с 18–19 до 40 шт. в горшках объемом 1 л (на 52–55 %). Незначительные расхождения значений при разных объемах горшка могут быть вызваны случайными факторами, а также несколько замедленным ростом побегов в горшках объемом 2 л.
Приживаемость растений V. oxycoccos сорта Фомич на конец сезона составила 98–99 %, сорта Краса Севера – 97–98 %. Сорт Фомич оказался несколько более устойчив к стрессовым условиям пересадки растений в горшки большим объемом. Таким образом, размер контейнера не оказывал существенного влияния на качество растений клюквы болотной V. oxycoccos исследуемых российских сортов.
Заключение. Таким образом, в результате исследований по разработке элементов технологий адаптации и доращивания клюквы болотной, полученной способом клонального микроразмножения, к условиям ex vitro, проведенной на базе РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева, получены экспериментальные данные, на базе которых можно проводить усовершенствование агротехнологий выращивания посадочного материала данного вида с учетом сортовых особенностей. Наилучшие показатели приживаемости и высокие морфометрические параметры адаптируемых микрорастений клюквы болотной (сортов Краса Севера и Фомич) выявлены при использовании в качестве субстратов торфа верхового типа, смеси торфа с вулканическим цеолитом 3 : 1 и смеси торфа с агроперлитом 3 : 1. Проведенные исследования по доращиванию клюквы болотной сортов Краса Севера и Фомич путем пересадки в контейнеры объемом 1–2 л показали, что через 3 месяца наблюдений отмечена высокая приживаемость изучаемых растений и к концу сезона не выявлено значимых различий в зависимости от объема горшка. Полученные результаты исследований показали высокую приживаемость растений V. oxycoccos (97–99 %) на этапе доращивания в горшках объемом 1–2 л с использованием верхового кислого торфа в качестве субстрата. Необходимо также отметить, что наиболее адаптивным и наиболее стрессоустойчивым в опыте по пересадке растений в контейнеры большим объемом оказался сорт Фомич. Исходя из полученных данных, в течение вегетационного сезона размер контейнера не оказывал существенного влияния на качество посадочного материала растений клюквы болотной исследуемых российских сортов.
Разработанные элементы технологий могут быть использованы для усовершенствования технологического цикла получения и выращивания посадочного материала клюквы болотной с применением клонального микроразмножения и дальнейшей адаптации при культивировании в открытом грунте в агроклиматических условиях Нечерноземной зоны России.
