Введение. Продуктивность и высокие показатели воспроизводительной способности коров напрямую зависят от производственных стрессов. Условия, которые создают дополнительный стресс для животных, например неправильно сбалансированный рацион, эндопаразитарные инфекции или акушерско-гинекологические заболевания, усугубляют ситуацию [1–3]. При анализе качества корма у лактирующих коров необходимо обращать внимание на естес­твенные загрязнители, в т. ч. микотоксины, которые продолжают оказывать серьезное воздействие на здоровье животных [4–6].Высокая степень контаминации грибами кормов может быть объяснена погодными условиями, особенно при повышенной влажности и высокой температуре. Подобные условия в период роста и уборки кормовых культур способствуют интенсивному росту плесени [7].Уровень контаминации грибами также зависит от способов и условий хранения и варьи­руется в зависимости от географических райо­нов и климатических регионов, подверженных образованию плесени, уровня влажности, температуры, аэрации, наличия насекомых и механических повреждений злаков [5].Микотоксины – это вторичные метаболиты, вырабатываемые грибами на этапе сбора урожая до хранения и распределения продуктов питания. Эти вещества продуцируются в основном пятью видами грибов (Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus sp., Claviceps sp., Alternaria sp.). Рост этих микроорганизмов и продукция их микотоксинов в основном влияют на наличие грибных спор, характер и плотность культур, климат и механические повреждения растений [4, 8].К наиболее изученным микотоксинам относятся афлатоксин, зеараленон и вомитоксин. Известно, что все они оказывают негативное влияние на функцию и продуктивность молочного скота [9].Зеараленон и афлатоксины способны напря­мую влиять на репродуктивную функцию, вызывая гормональную дисфункцию и клеточную токсичность, в то время как другие микотоксины оказывают лишь косвенное влияние на здоровье и плодовитость дойных коров за счет снижения потребления сухого вещества и всасывания питательных веществ в кишечнике [4].Максимально допустимая норма содержания микотоксинов в кормах тщательно изучена и признана во всем мире [4]. Например, допустимый предел содержания афлатоксина В1 в кормах для лактирующих коров составляет 20 мг/кг в США и Канаде [5], а также 10 и 5 мг/кг в Китае и Европейском союзе соответственно [6]. Предел вомитоксина в Европейском союзе составляет 1 270–1 750 и 5 000–10 000 мг/кг в Соединенных Штатах Америки (США). Фумонизин составляет 5–100 мг/кг в США и 2000 мг/кг в Европейском союзе [9]. Исследования загрязнения микотоксинами кормов в Китае обнаружили, что афлатоксин B1, зеараленон и дезоксиниваленол широко присутствовали во всех изученных кормах [10].Молоко, содержащее микотоксины, является критическим фактором безопасности для качества молока. При этом передача зеараленона в молоко минимальна из-за особенностей метаболизма в рубце [11].В свою очередь, исследователи предположили, что дезоксиниваленол (ДОН) биотрансформируется микробами рубца. Некоторые производные сохраняют часть своей первоначальной токсичности, в то время как другие становятся нетоксичными [12].Имеются противоречивые сообщения о попадании ДОН в молоко. Некоторые исследования не обнаружили ДОН в молоке, в то время как другие обнаружили различные дозы. При даче 300 мг/день в течение 5 дней обнаружили от 4 до 26 нг/мл ДОМ-1 (нетоксичный метаболит ДОН) в молоке. В другом исследовании 920 мг/сут скармливали чистый ДОН, в молоке было обнаружено менее 2 нг/мл ДОМ-1 [11].Ситуации осложняется тем, что один тот же вид грибов может производить несколько микотоксинов одновременно, и разные виды грибов могут сосуществовать в одном и том же корме [12]. Следовательно, возникают сложности в определении эффектов комбинированных микотоксинов.В нашем исследовании мы изучили действие микотоксинов, а именно афлатоксина, зеараленона и дезоксиниваленола, естественно присутствующих в кормах (силос, сено и концентраты), на организм лактирующих коров.Цель исследования – определение влияния микотоксинов на биохимические показатели крови и молока у коров в условиях интенсивного животноводства.Объекты и методы. Объектом исследований были лактирующие коровы, продуктивность которых в среднем составляла 9 180 кг. Животные содержались на двух молочных комплексах ОАО племенного хозяйства «Леднево» Владимировской области. Продуктивные и репродуктивные характеристики подопытных животных отражены в таблице 1. Таблица 1Характеристика экспериментальных коров ОАО «Леднево» ПоказательКомплекс № 1Комплекс № 2х±mх х±mх 123Удой за лактацию, кг8382,84±87,93*9221,72±112,54Количество лактаций, шт.22Возраст, год5,12±0,215,08±0,34Окончание табл. 1123Живая масса, кг545,29±15,44553,43±18,32Сервис-период, у коров, дни125,31±12,44119,64±10,73Период бесплодия, дни103,44±8,9191,48±9,38  На каждом комплексе было подобрано по 15 коров, у которых брали кровь для определения гематологических показателей, а также для проведения биохимических тестов с использованием автоматического биохимического анализатора BioSystemsA25 (США). Экспериментальные животные получали основной рацион, разработанный с учетом потребности в питательных веществах коров при лактации 28 кг/сутки (табл. 2). Таблица 2Питательность основных кормов П⁤оказательСеноСилосКомбикорм% обеспеченности к нормеКормовые единицы1,822,7412,4695Обменная энергия, МДж28,9739,11121,8497Сухое вещество, кг3,414,2710,22103Сырой протеин, г26,18540,641440,8369Переваримый протеин, г143,21356,141381,31107Сырая клетчатка, г112,971486,5351,7946Сахар, г115,8652,74769,1259Сырой жир, г8,97222,1524,8239Натрий, г3,4713,2191,23358Кальций, г69,1737,1557,11127Фосфор, г16,9711,1273,22123  Определение концентрации микотоксинов в корме, составляющем рацион экспериментальных животных, было выполнено с использованием жидкостной хроматографии высокого давления на масс-спектрофотометре (ВЭЖХ-МС).Определение уровня микотоксинов (зераленон, фумонизин и ДОН) в пробах молока проводили с использованием наборов ИФА Ridascreen в соответствии с прописанной процедурой исследований на анализаторе ChemWell.Для определения гомеостаза проводили ряд тестов, в т. ч. тромбиновое время. Для этого определяли скорость превращения фибриногена в фибрин в цитратной плазме после добавления в нее тромбина и кальция.При постановке коагуляционного теста фиксировали время свертывания плазмы крови после добавления к ней смеси тканевого тромбопластина и кальция.Активирование частичного тромбопластинового времени определяли за срок образования сгустка после добавления каолин-кефалиновой смеси и CaCl2 к бестромбоцитарной цитратной плазме.Результаты и их обсуждение. При проведении исследований кормов на микотоксины выя­вили, что на комплексе № 1 ОАО племенного хозяйства «Леднево» Владимировской области контаминация кормов грибками была выше, чем на комплексе № 2. Разница по ДОН в силосе сос­тавила 4,615 ± 0,088 против 2,041 ± 0,072 нг/кг, а в концентратах – 4,141 ± 0,075 против 2,152 ± 0,104. В свою очередь, концетрация ЗЕН в силосе, заложенном на хранение в комплексе № 1 и комплексе № 2, отличалась незначительно, в то время как в концентратах содержание микотоксина на комплексе № 1 было выше (526,141 ± 14,138 против 222,102 ± 9,431 мг/кг). Концентрация ФУМ в силосе и концентратах из хранилища кормов комплекса № 1 значительно превосходила данный показатель в кормахкомплекса № 2 (849,004 ± 9,116 против 521,033 ± 12,234 мг/кг и 854,912 ± 11,431 против 468,731 ± 8,642 мг/кг) (табл. 3). Таблица 3Содержание микотоксинов в силосе и концентратах МикотоксинКормКомплекс № 1Комплекс № 2ДОН, мг/кг (deoxynivalenol)Силос4,615±0,0882,0411±0,072Концентраты4,141±0,0752,152±0,104ЗЕН, мг/кг (zearalenone)Силос2,428±0,0442,097±0,092Концентраты526,141±14,138222,102±9,431ФУМ, мг/кг (fumonisins)Силос849,004±9,116521,033±12,234Концентраты854,912±11,431468,731±8,642  Исследуемые корма были заготовлены хозяйством на собственных полях летом 2022 г. Концентраты в основном были представлены зерном злаковых культур (пшеница 92 %, овес 7 % и ячмень 1 %). Силос был приготовлен из кукурузы и заложен в стандартные траншеи.Учитывая высокие концентрации микотоксинов в основных кормах, мы провели ретроспективный анализ климатических условий, наблюдавшихся во время период роста и уборки кормовых культур. Во второй половине лета в Юрьев-Польском районе Владимирской области отмечалась температура выше средних параметров для данной зоны, при этом часто шли дожди. Следовательно, высокая степень загрязнения кормов, наблюдаемая в нашем исследовании, может быть объяснена погодными условиями, которые способствовали росту плесени и образованию микотоксинов.Для выявления влияния разных концентраций микотоксинов провели гематологические тесты и биохимические исследования сыворотки крови. Для этого на каждом комплексе создали по экспериментальной группе коров (n = 15). При анализе гематологических показателейвыявили уменьшение уровня гемоглобина у коров, которые потребляли корма с более высоким содержанием микотоксинов (84,01 ± 3,11 против 98,69 ± 7,62) (табл. 4).Допускается возможность негативного влияния микотоксинов на образование эритроцитов и содержание гемоглобина, что может привести в дальнейшем к анемии у коров.Увеличение количества лейкоцитов в крови у коров 1-й экспериментальной группы (р < 0,05) под влиянием микотоксинов может привести к иммунодепрессии и повышенной восприимчивости к инфекционным заболеваниям.  Таблица 4Гематологические показатели экспериментальных коров ПоказательГруппа 1Группа 2Референсные значениях±mх х±mх minmaxНСТ Гематокрит, %29,72±0,5029,92±0,522446HGB Гемоглобин, g/l84,01±3,11*98,69±7,6290120RBC Эритроциты, 1012/l6,48±0,186,04±0,1057,5PLT Тромбоциты, 109/l588,54±27,46483,69±36,88100800WBC Лейкоциты, 109/l18,01±4,49*10,50±2,254,512Палочкоядерные нейтрофилы, %0,08±0,080,15±0,1025Сегментоядерные нейтрофилы, %52,31±3,98*39,54±2,652035Эозинофилы, %4,00±0,976,69±1,33220Базофилы, %0,08±0,080,31±0,1702Моноциты, %8,46±1,15*5,31±0,7827Лимфоциты, %35,08±3,0048,00±2,584575Эозинофилы ABS, 109/l0,49±0,130,70±0,1402,4Моноциты ABS, 109/l1,02±0,130,54±0,070,030,8Лимфоциты ABS, 109/l4,21±0,354,99±0,352,57,5Здесь и далее. Достоверно: * – Р < 0,05, ** – Р < 0,01, *** – Р < 0,001. Результаты биохимических показателей, представленные в таблице 5, показали, что некоторые биохимические показатели превысили нормальный физиологический уровень, что может быть результатом защитной реакции организма лактирующих коров на повышенные дозы микотоксинов.У коров, получавших рацион, более загрязненный зеараленоном и афлатоксинами, наблюдалось достоверное увеличение (Р < 0,05) аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ). Из-за воздействия микотоксинов может возникать повреждение печени у коров, о чем свидетельствует повышение активности печеночных ферментов.Возможно, изменения активности ферментов печени связаны с аномальной экскрецией метаболитов печени и гиперплазией желчных протоков. Fusarium индуцирует апоптоз через путь активации каспазы-3 и вызывает функциональные нарушения в гепатоцитах. Тогда как содержание общего белка, кальция и фосфора достоверно снижалось (р < 0,05) у коров, получавших контаминированный рацион с зеараленоном и афлатоксинами, по сравнению с контролем. Следовательно, данные микотоксины обладают гепатотоксичностью, гематотоксичностью и генотоксичностью. Таблица 5Биохимические показатели сыворотки крови экспериментальных коров ПоказательГруппа 1Группа 2Референсные значениях±mх х±mх minmaxБилирубин общий (TBil), мкмоль/л5,3±0,73,95±0,281,75,1АСТ (GOT), Ед/л162.213±43.08084.456±15.88448100АЛТ (GPT), Ед/л45.344±3.83534.475±5.4461737Мочевина (Urea), ммоль/л3,61±0,224,44±0,203,37,5Креатинин (Creat), мкмоль/л114,59±2,64117,76±2,550133Общий белок (Prot, total), г/л83.487±4.69474.900±3.5565977Альбумин (Alb), г/л36,33±0,6737,84±0,542743Щелочная фосфатаза (ALP, IFCC), Ед/л71,09±3,7458,65±3,962999Глюкоза (Glu), ммоль/л1,72±0,162,01±0,132,13,9Холестерин (Chol, total), ммоль/л3,52±0,324,21±0,282,36,6  При анализе биохимических результатов выявили превышение нормального физиологичес­кого уровеня, что может быть результатом защитной реакции организма на дойных коров. Биохимические показатели меняют свои значения, что характерно для определенных патологических поражений, поэтому биохимическую панель рекомендуется проводить каждый раз, когда есть подозрения на микоз и микотоксикоз. Более того, было показано, что зеараленон и афлатоксин обладают гепатотоксичностью, гематотоксичностью и генотоксичностью.Наши результаты по уровню белка показали значительную изменчивость при (p<0,05) в группе, получавшей рацион с большим количеством ДОН. Это может быть связано с ингибированием синтеза белка на клеточном уровне и, следовательно, преимущественно повреждать быстро пролиферирующие клетки иммунной системы. Это ингибирование, возможно, не является основным механизмом их иммунотоксического действия, но может оказывать избирательное воздействие на различные субпопуляции лимфоцитов (рис. 4).Параметры крови могут быть использованы для дополнительной оценки токсического воздействия микотоксинов на лактирующих коров. Предполагается, что повышенная активность сывороточных ферментов, таких как аланинаминотрансфераза (АЛТ) и аспартатаминотранс­фераза (АСТ), может отражать повреждение органов микотоксинами, индуцировать гепатотоксичность, вызывать изменения активности ферментов печени из-за аномальной экскреции метаболитов печени, из-за легкого повреждения печени и гепатоцеллюлярной цитоплазматичес­кой вакуолизации с ранним портальным фиброзом и гиперплазией желчных протоков.Для определения гомеостаза у коров, которые потребляли корма с разной концентрацией микотоксинов, мы проводили пробоподготовку в условиях хозяйства. Свежеполученную кровь подвергали ценрифугированию и в подготовленном рефрижераторе перевозили в специализированную лабораторию, где определяли активированное парциальное тромбопластиновое время, а также протромбиновое и тромбиновое время и активность фибриногена. Результаты исследований представлены в таблицах 6 и 7.При анализе коагуляционных тестов мы определили, что показатель активированного частичного тромбопластинового времени достоверно выше у коров, получавшим корма с более высоким содержанием микотоксинов (39,98±1,53 против 37,48±1,34). Можно предположить, что удлинение активированного частичного тромбопластинового времени свидетельствует о гипокоагуляции.При изучении результатов, полученных при определении тромбинового, протромбинового времени и содержания фибриногена у экспериментальных коров, мы проводили анализ, опираясь на данные, которые были получены С.Ю. Завалишиной с соавт. [13] и Ю.Л. Ошурковой с соавт.[14].При анализе показателей ТВ и ПВ у коров 1-й и 2-й экспериментальных групп существенных различий мы не обнаружили. В то же время отмечаем, что значения активированного частичного тромбопластинового времени близки к норме, обозначенной С.Ю. Завалишиной (2017). Таблица 6Уровень активированного парциального тромбопластинового (АЧТВ),протромбинового (ПВ), тромбинового (ТВ) времени у экспериментальных коров, с ПоказательНорма(данные Завалишиной С.Ю.)Группа 1Группа 2Активированное частичноетромбопластиновое время38,2±0,1437,48±1,3439,98±1,53Тромбиновое время15,1±0,1225,92±5,86826,98±5,679Протромбиновое время16,1±0,2420,04±0,84718,7±1,603  При анализе таблицы 7 необходимо отметить, что во всех опытных группах имеет место снижение содержания фибриногена, но у коров 1-й группы это снижение было более значимым.Таким образом, в экспериментальных группах коров отмечали удлинение протромбинового и тромбинового времени и снижение количес­тва фибриногена.  Таблица 7Уровень фибриногена у экспериментальных коров, г/л ПоказательФибриногенНорма (данные Ошурковой Ю.Л., Медведева И.Н.)2,75–3,65Группа 11,79±0,54Группа 22,44±0,24  Удлинение протромбинового времени может свидетельствовать о дефиците факторов свертывания системы крови вследствие патологии печени у животных. Полученные нами данные о воздействии микотоксинов на печень подтверждаются работами R.A. Coulombe [15], который указывал, что попав в организм животного, микотоксины всасываются и метаболизируются или детоксифицируются печенью в нейтральные или менее токсичные формы. Однако при большой концентрации могут перегрузить печень и вызвать развитие опухоли. У животных при вскрытии большинство токсинов обнаруживается в высокой концентрации в кишечнике, почках и печени.Патологическое воздействие высоких концентраций микотоксинов на печень также подтверждается в наших исследованиях снижением количества фибриногена. На это же указывает удлинение тромбинового времени. Увеличение ТВ позволяет нам предположить у коров, потребляющих корма с повышенным содержанием микотоксинов, гипербилирубинемию, гипо- или дисфибриногенемию.На основании полученных результатов можно предположить, что применение малокомпонентных рационов с низким качеством кормов и высоким содержанием микотоксинов негативно сказывается на состоянии печени, приводит к дистрофическим изменениям органа. В свою очередь, это оказывает влияние на систему коагуляционного гемостаза. Поскольку ряд факторов свертывания системы крови синтезируются в печени, то нарушения технологии кормления, связанные с дачей кормов с высокой контаминацией грибками, могут привести к нарушению коаугляционного гемостаза.Заключение. Впервые было проведено исследование коагуляционного гемостаза у коров при скармливании зараженных грибками кормов. Выявлены нарушения коагуляционного гемостаза у продуктивных животных и установлена связь с содержанием в кормах микотоксинов.При этом показатель активированного частичного тромбопластинового времени был достоверно выше у коров, получавших корма с более высоким содержанием микотоксинов, разница составила 6,3 % (р ≤ 0,01). Удлинение активированного частичного тромбопластинового времени свидетельствует о гипокоагуляции.Таким образом, в группе лактирующих коров, получавших корма с значительным содержа­нием микотоксинов, отмечали удлинение протромбинового и тромбинового времени и снижение количества фибриногена.