Введение. В 1940-х годах революцию в медицине произвело применение антибактериальных препаратов для лечения инфекционных заболеваний. Впоследствии как неправильное, так и правильное применение антибактериальных средств привело к распространению и формированию устойчивости к данным препаратам. С резистентностью связано снижение эффекта от лечения, более тяжелое и длительное течение болезни, увеличение частоты заболеваемости, рост количества смертей и увеличение экономического ущерба [1]. В настоящее время международной проблемой,  которая требует пристального внимания, для общественного здравоохранения является устойчивость к антибактериальным препаратам. Масштабность этой проблемы демонстрируют ежегодные смерти: в странах Европейского союза 25 тысяч человек умирают от инфекций, вызванных антибиотикорезистентными бактериями [1, 2]. Любое применение антибактериальных средств людям, животным или на растениях может сказаться на формировании и распространении устойчивости к этим препаратам. Помимо этого, резистентность к антибиотикам не признает ни географических, ни биологических границ. Так, если применять антибиотики в одних отраслях, условиях или странах, то это повлияет на распространение устойчивости к ним в других отраслях, условиях или странах [1, 3]. Резистентность к антибиотикам возникает при условии адаптации микроорганизмов к присутствию этих средств и дальнейшему их размножению. Устойчивость к одному определенному антибиотику впоследствии приведет к устойчивости к целому классу.  Резистентные к антибактериальным препаратам микроорганизмы сохраняются и передаются через пищу, воду и окружающую среду, при этом на передачу бактерий влияют такие факторы, как торговля, поездки и миграция людей и животных [4].По данным ВОЗ, ежегодно 600 миллионов человек заболевают из-за последствий употребления пищевых продуктов, которые загрязнены микроорганизмами или химическими веществами, т.е. почти каждый 10-й житель планеты, и умирают 420 000 человек, что приводит к потере 33 миллионов лет здоровой жизни (DALY). Хранение при комнатной или более высокой температуре продуктов питания, таких как ветчина, мясо птицы и картофельно-яичный салат, создает идеальные условия для размножения S. aureus и выделения токсинов. Потребление продуктов питания, содержащих токсины S. aureus, может привести к пищевому отравлению, вызванному энтеротоксином, уже через несколько часов.Устойчивость к антибактериальным препаратам является проблемой безопасности пищевых продуктов: применение антибиотиков у сельскохозяйственных животных позволяет устойчивым бактериям и генам резистентности передаваться через пищевую цепь от сельскохозяйственных животных людям [5]. Во многих странах мира отмечен рост количества устойчивых штаммов бактерий, выделенных от животных и из продуктов животного происхождения [5, 6]. Как правило, это возможно при употреблении пищевых продуктов, но также, имеет место и при непосредственном контакте с животными или через объекты окружающей среды [6]. Несмотря на принимаемые рядом государств меры, использование антибиотиков продолжает расти в глобальных масштабах в животноводстве и сельском хозяйстве. Прогнозируемый рост спроса на продукты питания животного происхождения может также способствовать более широкому использованию антибиотиков [7, 8].Проблема антибиотикорезистентности (АБР) существует более 60 лет, однако системные мероприятия по ее профилактике начаты лишь в 80-х годах XX в. Международный союз за разумное применение антибиотиков (Alliance for the Prudent Use of Antibiotics), целью которого является улучшение здоровья людей с помощью образовательных программ и поддержки научных исследований, имеет представительства более чем в 90 странах мира [9–11]. С 2000 г. борьба с антибиотикорезистентностью вышла на мировой уровень и ознаменовалась принятием на Всемирном Дне Резистентности в городе Торонто (Канада) Декларации по борьбе с антимикробной резистентностью [12]. В документе содержатся предложения, которые были приняты многими государствами как руководство к действиям.Цель исследования – определить резистентность к антибиотикам условно-патогенной и патогенной микрофлоры Escherichia coli, Salmonella spp., S. aureus, выделяемой из продуктов животного происхождения.Материал и методы. Материалом для исследований являлись образцы сырых и готовых к употреблению пищевых продуктов, отобранных в фермерских хозяйствах (молоко), в торговой сети и в предприятиях общественного питания Костанайской области. Всего исследовано 409 проб пищевых продуктов, из них: сборное сырое коровье молоко –159 проб; продукты птицеводства: яйца – 50 штук, сырые, свежие, замороженные, охлажденные тушки, полутушки, фарш, субпродукты кур, уток, гусей, индеек – 75 проб; полуфабрикаты (котлеты, пельмени, манты, биточки, шницели, филе, бедро, набор для бульона, суповой набор и т.д.) – 25; блюда общественного питания из мяса или с добавлением мяса птицы (салаты) – 50 проб.Отбор образцов и подготовку проб к посевам проводили стандартизованными и общепринятыми в пищевой микробиологии методами по ГОСТ 31904-2012 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний».Бактериологические и молекулярно-генети­ческие исследования проводились в Научно-исследовательском институте прикладной биотехнологии Костанайского регионального университета имени А.Байтурсынова в 2020–2021 гг.Выделение и идентификация микроорганизмов. Микроорганизмы выделяли с использованием классических микробиологических методик. Идентификацию бактерий проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных и биохимических свойств.Для выделения бактерий рода Escherichia coli использовали жидкие и плотные питательные среды. Для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших колоний к  E. coli определяли отсутствие оксидазы.У оксидазоотрицательных грамотрицательных культур определяли возможность образования индола, ацетоина, сероводорода, утилизации цитрата, интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментации сорбита, глюкозы и лактозы. У каждой отобранной колонии бактерий с целью дифференциации Escherichia от бактерий Citrobacter и Enterobacter проводили температурный тест (Эйкмана), который вместе с цитратным тестом позволяет дифференцировать бактерии группы кишечных палочек фекального происхождения от бактерий группы кишечных палочек, обитающих во внешней среде.Исследование проб на наличие штаммов рода Salmonella spp. проводили в соответствии с методическими указаниями МУ 4.2.2723-10. Идентификация изолятов проводилась с использованием классического биохимического тестирования, включающего ферментацию углеводов, производство сероводорода, индола, лизиндекарбоксилазы, уреазы, оксидазы, каталазы, MR-VP, а также других обычных тестов. Серотипирование проводили с использованием теста на агглютинацию слайдов с сыворотками к антигенам O и H (Petsal, Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Для выделения S. aureus исследуемый материал микробиологической петлей засевали на поверхность элективных сред, в качестве которых использовали желточно-солевой агар. Посевы бактерий инкубировали при 37 °С в течение 18–24 часов. При обнаружении в мазках по Граму грамположительных кокков делали высевы в жидкую селективную питательную среду – солевой бульон и по помутнению среды определяли присутствие коагулазо-положительных стафилококков. Для получения изолированных колоний культуры пересевали в одну из плотных селективно-диагностических сред: молочно-солевой агар, яично-желточно-солевой агар или кровяной агар. Для определения патогенности стафилококков ставили реакцию плазмокоагуляции. Наличие дезоксирибонуклеазной активности исследовали посевом на ДНКазную среду с толуидиновым синим.При наличии патогенного стафилококка в пробе через 18–24 часа наблюдается рост колоний желтого цвета с изменением среды с красного на желтый цвет.Тестирование изолятов на резистентность к антибиотикам. Профили антибиотикорезистентности культур определяли дискодиффузионным методом в чашках Петри на агаре Мюллера-Хинтона с дефибринированной кровью с использованием дисков с антибиотиками в соответствии с методикой МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» и Е-теста. Для тестирования использовали следующие диски с антибиотиками: ампициллин, амоксициллин, бензилпенициллин, цефоперазон, цефокситин, стрептомицин, канамицин, неомицин, гентамицин, тетрациклин, доксициклин, сульфаметокзол с триметопримом, эритромицин, тилозин. Чувствительность оценивали по диаметрам зон задержки роста в соответствии с рекомендациями, затем изоляты были классифицированы как устойчивые, среднеустойчивые или чувствительные к определенному антибиотику согласно рекомендациям EUCAST (версия 11.0), CLSI и МУК 4.2.1890-04.Определение генов резистентности. ДНК-материал для молекулярного исследования получали путем бактериального лизиса по рекомендациям Референтной лаборатории по резистентности к антибактериальным препаратам Европейского союза (Community Reference Laboratory for Antimicrobial Resistance) с небольшими изменениями. Выявление генов, кодирующих устойчивость к противомикробным препаратам, проводили методом ПЦР.Статистическая обработка данных. Статистический анализ данных проводили с помощью программы MS Excel 2010. Расчет среднего квадратичного отклонения (стандартное отклонение) рассчитывали с помощью онлайн-калькулятора allcalc.ru.Результаты и их обсуждение. Результаты исследований представлены за период с января по июль 2021 г. В таблице 1 отражены результаты выделения из пищевой продукции условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства выделенных изолятов бактерий были характерны для своего семейства и рода.  Таблица 1Результаты микробиологического исследования пищевой продукцииживотного происхождения ПродукцияВсего пробEscherichia coliSalmonella spp.S. aureusСырое коровье молоко159––43Яйца50Не выделеноНе выделеноНе выделеноТушки, полутушки птиц:замороженныеохлажденныесвежие    251Не выделеноНе выделено252Не выделеноНе выделено252523Фарш мясной25Не выделеноНе выделеноНе выделеноПолуфабрикаты25Не выделеноНе выделеноНе выделеноМясные блюда25Не выделеноНе выделеноНе выделеноСалаты с добавлением мяса птицы25Не выделеноНе выделеноНе выделеноСалаты без мяса25Не выделеноНе выделеноНе выделеноИтого38428246  Всего исследовано 384 пробы пищевых продуктов животного происхождения на содержание бактерий Escherichia coli, Salmonella spp. и S. aureus, из них 76 проб (19,8 %) не соответствовали требованиям санитарных правил и норм. Так, из 159 исследованных проб сырого коровьего молока всего в 43 пробах (27 %) выявлено содержание микроорганизмов S. aureus. В 75 исследованных тушках/полутушках птиц обнаружено: Escherichia coli в замороженных полутушках – 1 (4 %), в охлажденных – 2 (8 %), и во всех 25 свежих тушках обнаружены бактерии, что составляет 100 % обсемененности продукции. Бактерии рода Salmonella spp. выявлены в 2 свежих тушках (8 %). Оценка видового состава изолятов Salmonella spp. показала, что две выделенные культуры принадлежат серотипу S. еnteritidis. В соответствии с задачей у всех выявленных бактерий дискодиффузионным методом была определена чувствительность/резистентность к 25 антибактериальным препаратам следующих фармакологических групп: бета-лактамы (пенициллины: ампициллин, амоксициллин, бензилпенициллин; цефалоспорины: цефоперазон, цефокситин, цефподоксим), аминогликозиды (стрептомицин, канамицин, неомицин, гентамицин), амфениколы (левомицетин), тетрациклины (тетрациклин, доксициклин), хинолоны и фторхинолоны (налидиксовая кислота, ципрофлоксацин, энрофлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин), сульфаниламиды (сульфаметоксазол с триметопримом), нитрофураны (фурадонин, фуразолидон).Интерпретацию полученных данных проводили согласно инструкции к «Набору дисков для определения чувствительности к противомикробным препаратам – 1» [13], в соответствии с действующими рекомендациями European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) [14] и стандартом CLSI [15] (в случае отсутствия клинических контрольных точек), а также в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» [16].Тестирование бактерий на антибиотикорезистентность показало, что все исследуемые бактерии были резистентными как минимум к одному антибактериальному препарату. Причем большинство исследуемых штаммов бактерий обладали полирезистентностью, то есть были устойчивы к двум и более группам антибактериальных препаратов.Из 28 штаммов Escherichia coli – 4 (14,3 %) проявили резистентность к антибактериальным препаратам группы аминогликозидов (стрептомицин и канамицин), тетрациклинов (тетрациклин), фторхинолонов и нитрофуранов. Наименьшее число изолятов (3,6 %) показали невосприимчивость к цефоспоринам и сульфаниламидам (рис.).Штаммы Salmonella spp. показали 100 % устойчивость к тетрациклину, помимо этого 1 штамм был устойчив сразу к 2 антибиотикам, относящимся к группе аминогликозидов (стрептомицину и канамицину), в целом к данной группе антибиотиков резистентость была также 100 %. К антибактериальным препаратам группы бета-лактамов, цефалоспоринов, сульфаниламидов и нитрофуранов у выделенных изолятов Salmonella spp. обнаружена чувствительность.Следует отметить, что бактерии S. aureus, выделенные из молока коров, были почти на 11 % (5 изолятов) устойчивы к антибиотикам группы аминогликозидов и тетрациклинов.    Резистентность штаммов к антибактериальным препаратам  В целом из всех 76 микроорганизмов наибольшее количество изолятов проявили устойчивость к антибактериальным препаратам группы аминогликозидов и тетрациклинов – 12 штаммов, что составило 16 % от общего числа микроорганизмов. Наименьшее количество микроорганизмов проявили резистентность к сульфаниламидам (5 %) и цефалоспоринам (3 %). Среди исследованных штаммов  и S. aureus не обнаружена чувствительность ни к одной из взятых групп антибактериальных препаратов.Для определения генетических профилей резистентности грамотрицательных бактерий были использованы праймеры, которые подбирались нами с учетом использования классов антибиотиков и антимикробных препаратов в ветеринарной практике.В результате проведенных исследований 76 проб, проявлявших фенотипическую резистентность к антибактериальным препаратам, были протестированы методом ПЦР на наличие генов, кодирующих резистентность. Результаты представлены в таблицах 2, 3 и 4. Таблица 2Гены резистентности эшерихий Группа антибиотиковTEMSHVOXAIOXAIIIctxMctxM2cmyPERPER2Бета-лактамы3 3      АминогликозидыrmtBarmAaacA4aac(3)IIaphA1aadBaadAstrAstrB     131 ТетрациклиныtetAtetB–––––––43       СульфаниламидыSUL1SUL2SUL3dfr1 dfr5dfrA7–––  1      АмфениколыcmlAcatII–––––––         ХинолоныqnrAqnrBqnrSqepA–––––           По результатам тестирования 26 проб ДНК E. coli выявлены гены резистентности к бета-лактамам TEM и OXAI в 3 пробах каждый, к аминогликозидам aadB – 1 проба, aadA – 3 пробы и strA – 1 проба, тетрациклинам: tetA – 4 пробы, tetB – 3 пробы, сульфаниламидам (SUL3) – 1 проба. Генов, кодирующих резистентность к антибактериальным препаратам группы амфениколов и хинолонов, обнаружено не было.Результаты тестирования 46 проб ДНК S. aureus на наличие генов резистентности представлены в таблице 3.В процессе исследования ДНК S. aureus были обнаружены гены, кодирующие резистентность микроорганизмов к антибактериальным препаратам:– группы бета-лактамов – ген blaZ, тетрациклинов – tetK и tetM – в 4 исследованных образцах;– группы аминогликозидов и макролидов, гены aph(3) и ermC – в 2 ДНК каждый.В результате тестирования ДНК S. aureus гены, кодирующие резистентность к антибиотикам группы сульфаниламидов и амфениколов, не выявлены.  Таблица 3Гены резистентности стафилококков Группа антибиотиковblaZmecAmecC–Бета-лактамы4–––МакролидыermCermBermAmsrA2–––Аминогликозидыaac(6)-aph2aph(3)ant(6)––2––Тетрациклины tetKtetM––31––Сульфаниламиды dfrGdfrK––––––АмфениколыcatA9fexcfr–––––Таблица 4Гены резистентности сальмонелл ГруппаантибиотиковTEMSHVOXAIOXAIIIctxMctxM2cmyPERPER2Бета-лактамы1        АминогликозидыrmtBarmAaacA4aac(3)IIaphA1aadBaadAstrAstrB      111ТетрациклиныtetAtetB–––––––1        СульфаниламидыSUL1SUL2SUL3dfr1 dfr5dfrA7––– 1 2     АмфениколыcmlAcatII–––––––         ХинолоныqnrAqnrBqnrSqepA–––––           Из представленных данных в таблице 4 видно, что гены резистентности сальмонелл были выявлены в 4 из 6 исследуемых групп антибиотиков. Наиболее часто были выделены гены, кодирующие резистентность к аминогликозидам (гены aadA, strA, strB) и сульфаниламидам (гены SUL2 и dfr1). Гены, кодирующие резистентность к амфениколам и хинолонам, обнаружены не были.Заключение. По результатам проведенных нами исследований можно сделать вывод, что мясо, мясные и молочные продукты могут представлять серьезную опасность для здоровья человека, если они получены с нарушением санитарно-гигиенического режима при заготовке и на этапах обращения пищевой продукции (хранение, транспортирование и реализация). Усугубляет ситуацию и значительная распространенность резистентности микроорганизмов в продукции животноводства.Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать следующие выводы:– из 384 исследованных проб выделено и идентифицировано 76 микроорганизмов, из них 28 штаммов – E. coli, 2 штамма – Salmonella spp., 46 – S. aureus;– все исследуемые микроорганизмы проявили резистентность как минимум к одному антибактериальному препарату, большинство исследуемых штаммов обладали полирезистентностью;– наибольшее количество изолятов проявили фенотипическую устойчивость к антибактериальным препаратам группы аминогликозидов и тетрациклинов – 12 штаммов, что составило 16 % от общего числа микроорганизмов;– наименьшее количество микроорганизмов проявили резистентность к сульфаниламидам (5 %) и цефалоспоринам (3 %);– у 14,5 % микроорганизмов обнаружены гены кодирующие резистентность к бета-лактамным антибиотикам, у 12 % – к аминогликозидным препаратам. Гены резистентности к амфениколам и хинолонам выявлены не были.Полученные результаты свидетельствуют, что на территории Костанайской области Республики Казахстан циркулируют возбудители энтеропатогенных заболеваний, обладающие не только фенотипической, но и генотипической резистентностью к антибактериальным препаратам.