Введение. Респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота распространены повсеместно, характеризуются острым течением и являются одной из причин гибели животных [1, 2]. Наиболее распространенными из них являются инфекционный ринотрахеит (ИРТ), парагрипп-3 (ПГ-3), вирусная диарея болезнь слизистых оболочек (ВД-БС), респираторно-синцитиальная инфекция (РСИ) крупного рогатого скота [3–5].Иммунизация взрослого поголовья крупного рогатого скота (КРС) против острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) часто не решает проблемы защиты телят от вирусных инфекций по ряду причин, связанных с недостаточным количеством антител в молозиве матери, несвоевременным его выпаиванием, нарушением абсорбции иммуноглобулинов в кишечнике [6].Поэтому пассивная иммунизация высокоактивной поливалентной сывороткой, содержащей соответствующие вирусно-бактериальному фону хозяйства антитела, для защиты новорожденных телят от инфекций является неотъемлемой частью специфической профилактики и лечения вирусных респираторных инфекций молодняка КРС. Для этого успешно применяются различные сывороточные препараты, получаемые посредством гипериммунизации животных [7]. Успех гипериммунизации доноров-продуцентов во многом зависит не только от тщательного их подбора, качества антигена и адьювантных веществ вакцины, но и от правильно выбранной схемы гипериммунизации.Цель исследований – усовершенствовать технологию получения гипериммунной сыворотки против респираторных вирусных инфекций крупного рогатого скота и обеспечить ее высокое качество.Задачи: оптимизировать схему гипериммунизации и эксплуатации животных-доноров; оценить эффективность ревакцинации доноров в разные сроки после забора крови по титруантител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС КРС.Объекты и методы. Научно-производст­венный опыт по оптимизации схем вакцинации животных-продуцентов для изготовления гипериммунных сывороток против ОРВИ КРС проводили по ранее запатентованной технологии [8] в ФГБНУ ФАНЦА отдел ВНИИПО, хозяйствах Алтайского края. Для этого сформировали 4 опытных группы лактирующих коров-доноров с низкой продуктивностью. Доноров предварительно исследовали на инфекционные болезни согласно действующей инструкции «О порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов», а также на наличие вируснейтрализующих антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС КРС, в О-1 и О-4 группе находились животные с отсутст­вием антител к вышеуказанным вирусам, а вО-2 и О-3 группу входили животные с наличием антител к антигенам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС. Иммунизацию животных опытных групп проводили с использованием «Вакцины, ассоциированной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная» ФГБУ ВНИИЗЖ (г. Владимир) (№ рег. удост.12-1-4.16-3108, № ПВР 1-4.0/02669, СТО 00495527-0151-2019), в увеличивающих дозах подкожно, в область нижней трети шеи, по схеме, приведенной в таблице 1. Оценку воздействия забора крови в процессе вакцинации и ревакцинации животных-продуцентов проводили по клинико-физио­логическому состоянию животных (развитию поствакцинальных осложнений), общепринятым в ветеринарии методам клинического обследования.  Таблица 1Схема иммунизации и забора крови от животных-доноров ДеньВакцинация,забор кровиВакцина ассоциированнаяпротив ПГ-3, ИРТ и ВД-БС КРСэмульсионная инактивированная, дозО-1О-2О-3О-41I вакцинация44447II вакцинация666614III вакцинация888828Взятие крови, ревакцинация+–+8+8+–35Ревакцинация8––849Взятие крови, ревакцинация+–+8+8+–56Ревакцинация8––870Взятие крови, ревакцинация+–+8+8+–77Ревакцинация8––891Взятие крови++++  Забор крови до 6 л от каждого реципиента проводили в асептических условиях для изготовления поливалентной сыворотки спустя 28, 49, 70, 91 дней от начала иммунизации, в это же время были отобраны пробы крови: на морфологические исследования – определение общего количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина [9]; биохимические исследования сыворотки крови – содержание общего количества белка рефрактометрическим (ИРФ-22); фракции белка – нефелометрическим методом [10]; эффективность вакцинации оценивали по титру сывороточных антител к вирусу парагриппа-3 КРС в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), ИРТ и ВД-БС КРС – в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Методические указания по применению набора эритроцитарного диагностикума для серодиагностики ИРТ КРС в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) – в ТУ-10-19-327-92, эритроцитарного диагностикума для серодиагностики ВД КРС в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) – в ООО «Агровет» (Мос­ква).Достоверность средних значений оценивали по Стьюденту-Фишеру.Результаты и их обсуждение. Данные исследований сыворотки крови от животных-доно­ров во время формирования опытных групп на наличие специфических антител к вирусу ПГ-3, ИРТ, ВД-БС КРС представлены в таблице 2.  Таблица 2Титр сывороточных антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС КРС ГруппаТитр антител к вирусу (% от числа участвующих в опыте)ПГ-3ИРТВД-БСО-1 n = 6–––О-2n = 61:8 (50)1:16 (50)1:4 (33)1:8 (67)1:4 (100)О-3 n = 71:8 (42)1:16 (58)1:4 (40)1:8 (60)1:4 (100)О-4 n = 6–––  Трехкратная иммунизация продуцентов ассоциированной вакциной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи крупного рогатого скота в увеличивающихся дозах через 14 дней после последнего введения обеспечивает повышение антигемагглютининов в сыворотке крови к вирусу ПГ-3 в среднем разведении 1:48 и 1:45 в О-1 и О-4 группах, с достоверным увеличением во О-2 группе (Р ≤ 0,01) по отношению к животным О-1 группы, соответственно в О-3 группе к донорам О-4 в 6,6–6,4 раза и в 20,0–18,2 раза по отношению к исходным значениям. Соответственно к вирусу ИРТ в среднем титр антител составил 1:72 и 1:80 в О-1 иО-4 группах животных, а в О-2 и О-3 увеличился в 13,2 и 12,5 раз в сравнении с исходными показателями. Титр вируснейтрализующих антител к ВД-БС у животных О-1 и О-4 групп в среднем составил 1:64–1:85, в О-2 увеличился в 37,2 раза, в О-3 группе животных – в 41 раз (Р ≤ 0,01) (табл. 3). Таблица 3Титры специфических антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС КРС ИнфекцияГруппаО-1О-2О-3О-412345Через 28 дней от начала иммунизацииПГ-31:16–1:641:48±24,71:128–1:5121:320±210,3**1:128–1:5121:292±205,2**1:8–1:641:45±28,9ИРТ1:16–1:1281:72±61,31:64–1:1281:106±33,01:64–1:1281:100±34,21:32–1:1281:80±52,5ВД-БС1:32–1:1281:64±49,51:64–1:2561:149±87,41:128–1:2561:164±62,4**1:64–1:1281:85±33,0Через 49 дней от начала иммунизацииПГ-31:64–1:5121:309±223,21:256–1:10241:725±340,0**1:512–1:10241:877±249,8*1:128–1:5121:332±171,7ИРТ1:32–1:5121:346±198,71:128–1:5121:362±170,01:256–1:5121:438±124,91:64–1:5121:394±191,6ВД-БС1:128–1:2561:170±66,01:128–1:5121:362±170,0**1:128–1:5121:384±165,0**1:128–1:5121:277±125,0Через 70 дней от начала иммунизацииПГ-31:128–1:5121:320±210,31:512–1:10241:768±280,4**1:512–1:10241:950±280,41:256–1:5121:384±140,2ИРТ1:128–1:5121:362±170,11:256–1:5121:384±140,21:256–1:5121:475±96,71:128–1:5121:405±170,1ВД-БС1:128–1:2561:192±70,11:256–1:5121:384±140,2**1:256–1:5121:438 ±124,91:256–1:5121:341±132,1Окончание табл. 312345Через 91 день от начала иммунизацииПГ-31:128–1:5121:384±198,21:512–1:10241:938±209,6*1:512–1:10241:950±280,4*1:256–1:5121:426±132,0ИРТ1:256–1:5121:426±132,11:256–1:5121:426±132,11:512–1:5121:512±0,01:256–1:5121:469±104,5ВД-БС1:128–1:2561:234±52,21:256–1:5121:469±104,51:256–1:5121:469±104,5*1:256–1:5121:426±132,1* Р ≤ 0,05, **Р ≤ 0,01.  Наличие вируснейтрализующих антител в процессе гипериммунизации доноров по предложенной схеме в сравнении с предыдущим взя­тием крови выглядит следующим образом. Через 49 дней титр антител к вирусу ПГ-3 в О-1 группе увеличился в 6,4 раза, соответственно в О-2 – в 2,2 раза (Р ≤ 0,01), в О-3 – в 3 раза (Р ≤ 0,05), в О-4 – в 7,3 раза в сравнении с результатами исследований сыворотки крови на 28-й день взятия крови. В 70-й день взятия крови по отношению к 49-му дню количество вируснейтрализующих антител в сыворотке животных О-1 группы увеличилось на 3,5 %, в О-2 – на 5,9 (Р ≤ 0,01),в О-3 – на 8,3; в О-4 – на 15,6 %. На 91-й день, соответственно в О-1 – на 20,0 %; во О-2 – на 22,1 (Р ≤ 0,05); в О-3 титр антител к вирусу ПГ-3 остался на прежнем уровне с достоверной разницей (Р ≤ 0,01) к О-1 группе животных,в О-4 группе – на 10,9 %. К вирусу ИРТ количество специфических антител в сыворотке крови животных-доноров на 49-й день увеличилось в 4,8 раза в О-1 группе, в О-2 – в 3,0; в О-3 – в 4,3; в О-4 – в 4,9 раза. В 70-й и 91-й день титр антител к вирусу ИРТ увеличился в О-1 группе животных-продуцентов на 4,6–17,6 %; в О-2 – на 6,0–10,9; в О-3 – на 8,4–7,7 и в О-4 – на 2,7–15,8 %. Сывороточные антитела к ВД-БС на 49-й день в О-1 группе доноров увеличились в 2,6 раза; в О-2 – в 2,4 (Р ≤ 0,01); в О-3 – в 2,3 (Р ≤ 0,01); в О-4 – в 3,2 раза, соответственно на 70–91-й день исследования в сыворотке крови опытных животных отмечали увеличение титра антител: в О-1 группе – на 12,9–21,8 %; в О-2 – на 6,0–22,1; в О-3 – на 14,0–7,0 (Р ≤ 0,05);в О-4 группе – на 23,1–24,9 %.В процессе иммунизации доноров-продуцен­тов меняется и биохимический состав сыворотки крови, после первых 3 заборов крови регистрировали увеличение количества гамма- и бета-глобулиновых фракций при уменьшении содержания альбуминов до 30,0–35,0 %. В это же время установлено повышение лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови соответственно на 35,7 и 46,5 % в сравнении с исходными данными. Эритропоэз и лейкопоэз на протяжении всего эксперимента характеризовался волнообразным изменением к нижним и средним границам референтных значений.Для получения сыворотки с достаточно высокими титрами большое значение имеет схема иммунизации и выбор животных-продуцентов. В нашем случае подбор продуцентов с нали­чием сывороточных антител (О-2 и О-3) к вводимой вакцине оказался более удачным и уже после первого цикла 3-кратного введения малых доз антигена позволил получить сыворотку с достаточно хорошим содержанием антител, что является важным фактом при изготовлении гипериммунных сывороток.По завершении начального цикла гипериммунизации следовал 1 забор крови с ревакцинацией в это же день в О-3 и О-4 группах, а вО-1 и О-2 – с интервалом 7 дней. Животным-продуцентам предоставлялся отдых в 21 день между взятиями крови. Однократная промежуточная ревакцинация конечной дозой антигена на сенсибилизированном животном давала возможность вновь получать сыворотку в увеличивающихся титрах, а последующие умеренные кровопускания никак не отразились на физиологическом состоянии коров-продуцентов, по окон­чании научно-производственного опыта животные остались в стаде для дальнейшей эксплуатации.Известен способ получения гипериммунной сыворотки против парагриппа-3 крупного рогатого скота: здоровых 1,5-летних быков иммунизируют путем внутривенного введения антигена через каждые 5 дней в дозах соответственно 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 40 мл. Спустя 6 дней после 7-й инъекции от быков-доноров получают кровь. При титровании сывороток крови быков установлена вируснейтрализующая активность в разведениях 1:256–1:1024. Известен также способ получения гипериммунной сыворотки против парагриппа-3 крупного рогатого скота, отличающийся тем, что быков иммунизируют вакциной «Паравак» через каждые 7 дней, причем вакцину вводят интраназально, 1 раз по 2 мл в каждую ноздрю, затем подкожно 3 раза – 5; 6; 7 мл и внутривенно 2 раза – 10; 15 мл, через 2 недели после последнего введения вакцины из крови получают сыворотку. Предложенный нами способ менее трудоемкий, первое взятие крови производится на 13–28 дней раньше, чем в представленных выше способах. Проведение ревакцинации (О-2 и О-3 группах) в день взятия крови позволяет сократить время ветеринарных специалистов и обслуживающего персонала на фиксацию животных, снижается стрессовая нагрузка на животных-доноров, при этом антигемагглютенины к вирусу ПГ-3 находятся в пределах 1:512–1:1024, специфические антитела к вирусу ИРТ и ВД-БС – в титрах 1:256–1:512.Заключение. Установлено, что проведение ревакцинации коров-доноров сразу после забора крови позволяет получить гипериммунную сыворотку с достаточно высокими средними значениями титра специфических антител к вирусу ПГ-3: в О-2 группе в 2,5 раза выше, чем в О-1, соответственно в О-3 в 2,2 раза выше по сравнению с О-4 группой, к вирусу ИРТ – на 9,0 %. Титр вируснейтрализующих антителк ВД-БС во О-2 группе по отношению к О-1 увеличился в 1,9 раза, в О-3 соответственно к О-4 – на 10,0 %. Лактирующие коровы-доноры по окончании научно-производственного опыта находились в удовлетворительном состоянии и остались в стаде для дальнейшей эксплуатации.