Введение. В условиях необходимости интенсификации развития АПК и замещения импортного растительного материала в РФ разработка методов и технологий по предупреждению и борьбе с болезнями и вредителями является приоритетным стратегическим направлением аграрной науки. Немалую долю научных работ в данной отрасли представляют исследования в области грибных заболеваний, которые значительно поражают как полевые, овощные, так и декоративные культуры [1–3].Одними из наиболее распространенных, вредоносных и неоднородных по морфометрическим признакам являются грибы рода Fusa­rium, включающего множество патогенных видов [4, 5]. Большинство представителей рода Fusarium – фитотрофы, способные поражать многие виды культурных растений, вызывая у них широкий спектр патологических изменений [6–9]. Самыми распространенными заболеваниями, вызываемыми фузариумом, являются гнили корней, увядание, реже – болезни плодов и семян [3, 5, 10]. Болезни растений, вызываемые грибами рода Fusarium, принято называть фузариозами [11, 12]. По всему миру на протяжении уже более ста лет ведущие ученые исследуют возбудителей фузариоза полевых сельскохозяйственных культур, однако на декоративных культурах проведение исследований данных грибных заболеваний начались не так давно [10–15].Заражение декоративных древесно-кустарни­ковых растений грибами рода Fusarium в большинстве случаев приводит к инфекционному полеганию сеянцев, так называемой «черной ножке», фузариозной корончатой и корневой гнилям [16–19].Среди декоративных культур наиболее подвержены фузариозу многолетние травянистые растения, о чем свидетельствуют отчеты о фитосанитарной оценке состояния коллекций ботанических садов по всему миру. В Батумском ботаническом саду было выделено 10 видов патогенных штаммов грибов рода Fusarium, вызывающих корневую гниль у 20 видов травянис­тых многолетников. Наиболее распространенным возбудителем являлся F. oxysporum (Schlecht.) Snyd. Et Hans. [20–22].При оценке коллекций Никитского ботаничес­кого сада от 2018 г. в качестве фитопатогенных возбудителей фузариоза луковиц тюльпана (Tulipa L.) указан Fusarium oxysporum f. sp. tulipae, а на стеблях и листьях тюльпанов во время цветения обнаружен Fusarium avenaceum (Fr.) Sacc. Ирисы (Iris L.) и канны (Canna L.) также поражены фузариозом, вызванным Fusa­rium spp. [23]. На массово пораженной коллекции садовых хризантем (Chrysanthemum L.) в 2016 г. были обнаружены Fusarium oxysporum Schltdl., F. moniliforme Sheld, F. sambucinum Fuckel [21, 24, 25].В ГБС РАН им. Н.В. Цицина и Ботаническом саду Петра Великого в 2016–2017 гг. показатель зараженности коллекции флокса фузариозом также был незначителен [26–30]. Предположительно, это может быть связано с высоким содержанием у флокса антоциановых пигментов, которые, согласно исследованиям, могут приводить к повышению общей устойчивости растений к фузариозу [31, 32].Цель исследований – выявить и определить агрессивность комплекса патогенной микобиоты, которая присутствует на рассаде и растениях однолетних цветочных культур.Материалы и методы. Материал для исследований – линейный материал, больные растения антирринума и патогенные микроорганизмы из разных родов.Болезни, рассматриваемые в статье, относятся к факультативным патогенам и хорошо растут на агаризованных питательных средах различного состава. Для выделения и культивирования этих грибов чаще всего используют универсальные среды, в том числе стандартную среду Чапек, картофельный и морковный агар.В стандартную среду Чапека входит сахароза – 30 г, натрий азотнокислый (NaNO3) – 2 г, калий фосфорнокислый однозамещенный (KH2PO4) – 1 г, магний сернокислый (MgSO4 7H2O) – 0,5 г, калий хлористый (KCl) – 0,5 г, железо сернокислое закисное (FeSO4 7 H2O) – 0,01 г, агар – 20 г, вода дистиллированная – 1 л. В наших исследованиях мы использовали сухую среду Чапека в виде порошка (производитель ООО «БиоКомпас – С»).Выделение патогенов из растительного материала. Патогенные грибные болезни выделяли из растений с выраженными симптомами заболевания. Образцы пораженных растений после сбора поместили в отдельные бумажные пакеты. Каждый образец был снабжен этикеткой, в которой указывали место и дату сбора, сорт и название растения, фамилию собиравшего.Суть метода – исследуемый материал предварительно отмывали от почвенных частиц и проводили его поверхностную стерилизацию для освобождения от эпифитной микобиоты. Поверхностную стерилизацию анализируемого материала проводили 1 %-м раствором КMnO4 (10 мин) с последующим промыванием дистиллированной водой. На границе пораженной и здоровой ткани стерильным скальпелем отрезали небольшие кусочки и раскладывали в приготовленные чашки Петри, которые помещали в термостат, инкубировали при 23–25 °С. Через 5 сут появившийся грибной налет анализировали в поле зрения микроскопа при увеличении 16 × 40 и отбирали образцы для пересева на питательные среды и выделения в «чистые культуры» [33].Метод получение «чистых культур». «Чистые культуры» грибов выделяли путем посева грибного налета на агаризованную питательную среду Чапека. Для очищения мицелия культивируемого гриба от сопутствующих микроорганизмов применяли метод «посева иглой». Небольшое количество мицелия подцепляется на лабораторную иглу и помещается в заранее приготовленную чашку Петри с питательной средой. Далее ставится в термостат на 14 суток, рост мицелия происходит при температуре 23–25 °С. Идентификацию проводили путем анализа их культурально-морфологических характеристик невооруженным глазом и в поле зрения микроскопа с использованием определителей (Саттон Д., Фотергилл М., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. М.: Мир, 2001; Определитель болезней сельскохозяйственных культур / М.К. Хохряков [и др.]. Л.: Колос, 1984).Оценка степени агрессивности патогена. Для проведения данного опыта были взяты устойчивые и восприимчивые образцы. Почву заранее прокаливали при температуре 150 °С, после остывания доводили ее до влажности 90 % и равномерно заполняли кассеты. Далее по схеме производили посев исследуемого материала растений антирринума. После посева кассеты (24 ячейки (260 мл 530 × 340 мм)) укрывали полиэтиленовой пленкой и устанавливали в световую комнату под светоустановку (день, ночь). Когда растения достигли фазы 5 настоящих листьев, проводили опрыскивание суспензией спор исследуемых штаммов.Приготовление суспензии спор. В чистую культуру гриба с хорошо разросшимся мице­лием (чашка Петри) наливали дистиллированную воду 20 мл, затем шпателем Дригальского проводили смыв конидий (такой смыв с одной чашки проводится 2 раза). Полученную суспензию процеживали через 3 слоя марли в колбу, доводя до 40 мл готового раствора, затем встряхивали суспензию в течение 10 мин на установке «Вортекс» и подсчитывали концентрацию полученной суспензии с помощью камеры Горяева. Концентрация суспензии составляла 2 ∙ 105 спор в мл для Alternaria и 2 ∙ 107 спор в мл для Fusarium. После опрыскивания образцы растений в кассетах устанавливали под каркасы и накрывали полиэтиленовой пленкой. Для заражения использовали свежеприготовленную суспензию спор.Учеты проводили на 5-е, 10-е, 15-е сут по следующей шкале:0 баллов – практически устойчивые, поражено не более 20 % растений, средневзвешенный балл до 0,8;1 балл – слабовосприимчивые, поражено 21–40 % растений, средневзвешенный балл 0,9–1,6;2 балла – средневосприимчивые, поражено 41–60 % растений, средневзвешенный балл 1,7–2,4;3 балла – восприимчивые, поражено 61–80 % растений, средневзвешенный балл 2,5–3,2;4 балла – сильновосприимчивые, поражено 81–100 % растений, средневзвешенный балл 3,3–4,0.По результатам проявления патогенности определяли наиболее агрессивный штамм [17].Результаты и их обсуждение. Посев родительских линий проводили в остекленной отапливаемой теплице на территории УНПЦ «Овощная опытная станция имени В.И. Эдельштейна» по стандартной агротехнике. Дополнительное освещение не применяли. Семена высевали в контейнеры с торфом и присыпали тонким слоем прокаленного речного песка для уменьшения испарения влаги, улучшения контакта семян с субстратом и снижения вероятности появления грибных болезней. Контейнеры с посевами прикрывали однослойной полиэтиленовой пленкой с регулярным ежедневным проветриванием и удалением конденсата. Пленку снимали после появления всходов.При выращивании рассады учитывали такие факторы, как влажность субстрата, грибные инфекции, высокая температура воздуха (выше 18 °С), недостаточное освещение (рассаде однолетних культур требуется 15–20 000 Люкс), выращивание без прищипки на ранних стадиях развития (в фазе 2–3 узлов), негативная реакция на пересадку в стадии старше трех пар листьев.В период выращивания рассады было выявлено, что всходы у Antirrhinum majus были сильно поражены «черной ножкой», а, как известно, «черная ножка» относится к группе корневых гнилей, которая вызывается различными паразитными и полупаразитными грибами. В 60-е гг. XX в. в Америке из-за данного комплекса заболеваний перестали выращивать данные виды на срезку, в связи с тем, что большинство сортов были к нему очень чувствительны.В первые 10 сут от пикировки сеянцев проя­вилась «черная ножка» на растениях. Она проя­вилась в виде почернения гипокотиля сеянцев, стебли у основания имели черную окраску и были истончены у основания, корешки были подгнившими (рис. 1).    Рис. 1. Проявление «черной ножки» на вегетирующих растениях антирринума  При выращивании такой рассады в условиях открытого грунта растения теряли тургор, желтели и поникали. В связи с этим остро всталвопрос о ведении селекции по направлению устойчивости и о создании искусственного инфекционного фона для оценки устойчивости исходного селекционного материала. Выделение комплекса патогенов проводили с больных растений антирринума методом раскладки пораженных частей на питательную среду (см. методику) (рис. 2).   аб Рис. 2. Пораженные вегетативные части растений антирринума: а – культура (стебельс листьями, корень); б – идентификация методом раскладки  В результате проведенной раскладки проя­вился мицелий, с которым проведена работа по идентификации патогенов до рода. Идентификацию проводили при помощи микроскопа «Биомед-6» с фотонасадкой при увеличении 40/0.65 (160/0.17). При проведении микроскопирования выявлены грибные патогены из родов Alternaria, Fusarium, Pythium и представители низших плесневых грибов Penicillium, Mucor (рис. 3).    Рис. 3. Конидии Alternaria и Fusarium под микроскопом  В ходе микроскопирования в дальнейшую работу были отобраны 5 штаммов из рода Alternaria, выделенных с листьев и цветков, и 10 штаммов из рода Fusarium, выделенных с корешков, стебля, цветков и листьев, как наиболее патогенных. Данные штаммы отличались по цветовой гамме и конидиям. В результате многократных пересевов были получены чистые культуры патогенов из родов Alternaria и Fusarium.В ходе работы по определению агрессивности выделенных штаммов методом опрыскивания суспензией спор (см. методику) нами были отбракованы штаммы патогенов из рода Alternaria, так как они оказались с низкой сте­пенью патогенности (табл. 1).   Таблица 1Оценка агрессивности штаммов рода Alternaria Номер штаммаШифрБаллПроисхождение1ААЛ-11,0С листовой пластины2ААЦ-20,9С цветоноса3ААЛ-30,9С листовой пластинки4ААС-41,0Со стебля 5ААЦ-50,5С цветоноса   По фузариозу из 10 штаммов было выделено 3, это FАЛ-2, FАК-7 и FАС-9, наиболее агрессивным из них оказался штамм FАК-7, который был выделен с корневой системы антирринума линии А-5-1 (табл. 2). Принудительно инфицированные растения данным штаммом были угнетенными, плохо развивались, слабо цвели или погибали совсем. С данным штаммом будет продолжена дальнейшая селекционная работа по созданию инфекционного фона для селекции антирринума на устойчивость. В таблице 3 представлена характеристика агрессивного штамма. Таблица 2Оценка агрессивности штаммов рода Fusarium Номер штаммаШифрБаллПроисхождение1FАЦ -11,0С цветков2FАЛ-22,4С листовой пластины3FАС -32,1Со стебля4FАК -41,4С корня 5FАК -51,0С корня 6FАЛ -61,7С листовой пластинки7FАК- 74,0С корня8FАЦ -80,9С цветков9FАС-93,3Со стебля10FАК -101,0С корня Таблица 3 Характеристики колоний Fusarium (FАК-7) ПризнакОписаниеЦвет мицелияСерый Край мицелияРовныйПоверхность мицелияРовная, пушистаяПрофиль мицелияПлоскийСтруктура колонииОднородная РеверсБелыйОбразование конидийОбильноеФорма колонииОкруглыеРазмер колоний, мм2–10 Число перегородок у конидии, шт.От 2 до 6 В дальнейшем будет проведен ПЦР-анализ выделенных штаммов для определения вида и будет создан инфекционный фон по оценке исходного материала антирринума к корневым гнилям, которые вызывает патоген рода Fusarium.Заключение. В связи с тем, что львиный зев (Antirrhinum majus) в основном произрастает во Франции, Испании, Кипре, Израиле и других странах, данная культура может быть устойчива к патогенам именно в этих регионах возделывания. Когда мы приобретаем семена данной культуры у иностранных производителей и пытаемся их адаптировать к условиям выращивания в России, в нашем случае это УНПЦ «Овощная опытная станция имени В.И. Эдельштейна», то, как следствие этого, растения могут терять заявленную устойчивость к патогенам. В связи с этим в результате иммунологической работы были выявлены образцы, на которых проявилось заболевание. В ходе исследований выявлены грибные патогены из родов Alternaria, Fusarium, Pythium и представителей низших плесневых грибов Penicillium, Mucor. В коллекцию было отобрано 5 штаммов из рода Alternaria и 10 штаммов Fusarium как наиболее патогенные и часто встречающиеся на рассаде и растениях антирринума патогены. При тестировании агрессивности отобран один штамм по фузариозу FАК-7, который был выделен с корневой системы. Данный штамм будет вовлечен в селекционно-иммунологический процесс по работе над устойчивостью и при создании инфекционного фона. С остальными штаммами будет проделана работа по определению видового состава методом ПЦР.